人Osteocalcinelisa试剂盒 新品

产品介绍：

一、技术原理与创新特性

双抗体夹心ELISA技术：

抗体对设计：采用靶向骨钙素N端（1-20aa）和C端（37-49aa）的高亲和力单克隆抗体对，避免与基质Gla蛋白（MGP）交叉反应

羧化形式检测：通过特殊缓冲体系可选择性检测羧化型（Gla-OC）或未羧化型（Glu-OC）骨钙素

抗干扰设计：添加EDTA可有效螯合样本中的钙离子，防止蛋白降解

2025年技术升级：

新增全自动兼容版本（适用于Roche cobas e801等平台）

标准品溯源至WHO国际标准（NIBSC 12/174）

采用化学发光数字ELISA技术（灵敏度提升至0.01 pmol/L）

二、试剂盒核心组件与关键参数

标准配置清单：

预包被微孔板（96孔×5板套装，真空铝箔包装）

冻干标准品（7点梯度：0.5-150 ng/mL，含NIST可溯源证书）

即用型检测系统：

碱性磷酸酶（ALP）标记二抗（4℃稳定12个月）

CSPD化学发光底物（信号持续时间达2小时）

专用样本稀释液（含蛋白酶和磷酸酶抑制剂）

性能指标：

参数  规格  临床相关性

检测范围  0.5-150 ng/mL  覆盖儿童至老年生理范围

灵敏度  0.15 ng/mL  可检测早期骨代谢异常

精密度  板内CV<6%，板间CV<9%  符合CLIA认证要求

特异性  与MGP交叉反应<0.1%  确保检测准确性

三、实验操作标准化流程

样本处理关键点：

血清采集：推荐使用血清分离管（SST），避免溶血（血红蛋白<50mg/dL）

稳定性数据：

室温：≤4小时

4℃：≤72小时

-80℃：≤2年（避免反复冻融>3次）

特殊处理：骨组织样本需经0.1M HCl提取（1:10 w/v）

优化操作步骤：

平衡：所有试剂室温平衡30分钟（严格计时）

加样：推荐使用多通道移液器（避免产生气泡）

孵育条件：37℃水浴振荡（500rpm）可缩短20%时间

信号读取：化学发光模式（积分时间200ms）

四、临床应用与科研价值

临床诊断阈值：

骨质疏松：绝经后女性<15 ng/mL提示高风险（FRAX评分补充）

Paget骨病：>70 ng/mL与疾病活动度正相关（r=0.82）

慢性肾病-MBD：羧化型/总骨钙素比值<0.3预示血管钙化

2025年研究突破：

发现骨钙素通过GPRC6A受体调控糖代谢的新机制

抗骨吸收药物（如地诺单抗）治疗后4周骨钙素下降≥50%预示疗效

太空骨丢失研究中显示：微重力环境下骨钙素昼夜节律消失

五、质量控制与问题处理

质控标准：

标准曲线拟合：必须采用四参数逻辑（4PL）模型

质控样本要求：每板应包含正常值和病理值质控

可接受标准：

空白OD值<0.1

质控品回收率90-110%

故障排除指南：

异常现象  可能原因  解决方案

标准曲线R2<0.98  标准品溶解不充分  37℃水浴助溶后涡旋混合

信号饱和  样本未适当稀释  对高值样本进行1:10-1:100稀释

孔间差异大  洗板不彻底  检查洗板机管路，增加浸泡步骤

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感