人MIG/CXCL9elisa试剂盒 新品

人MIG/CXCL9elisa试剂盒

产品简介:

1. 试剂盒基本信息

检测目标：人γ干扰素诱导单核因子（MIG/CXCL9），属于CXC趋化因子家族，主要由IFN-γ诱导产生，参与Th1型免疫反应和T细胞募集。

检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆等。

灵敏度：通常 <5 pg/mL（不同品牌可能有所不同）。

检测范围：常见 15.6–1000 pg/mL（部分试剂盒可扩展到 7.8–2000 pg/mL）。

特异性：仅检测天然或重组人CXCL9，不与CXCL10（IP-10）、CXCL11（I-TAC）或其他趋化因子交叉反应。

2. 试剂盒组成（96T）

组分  规格  储存条件

预包被抗CXCL9抗体微孔板  96孔  2–8℃（干燥）

重组人CXCL9标准品  冻干粉或液体（0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）  -20℃

生物素标记抗CXCL9检测抗体  1瓶（120 μL）  -20℃

HRP标记链霉亲和素  1瓶（120 μL）  -20℃

TMB显色液  10 mL  4℃（避光）

终止液（1M H?SO?）  10 mL  室温

洗涤缓冲液（20×PBS-Tween）  50 mL  室温

样本稀释液/封闭液  20 mL  2–8℃

封板膜  2张  室温

3. 检测原理

抗原捕获：样本中的CXCL9与预包被在微孔板上的抗体结合。

信号放大：加入生物素标记的二抗，形成“抗体-CXCL9-生物素二抗”复合物。

酶催化显色：HRP-链霉亲和素与生物素结合，催化TMB显色（蓝色→黄色）。

定量分析：450 nm测OD值，CXCL9浓度与吸光度成正比。

4. 操作步骤（简要）

标准品复溶与稀释（按说明书梯度稀释）。

加样：100 μL/孔（标准品、样本、空白对照），37℃孵育 1.5–2小时。

洗涤：用1×洗涤液洗板 3–5次。

加检测抗体：100 μL/孔，37℃孵育 1小时。

加酶结合物：100 μL/孔，37℃孵育 30分钟。

显色：加TMB避光反应 10–15分钟（显蓝色）。

终止：加终止液（变黄色），30分钟内测 450 nm（参考630 nm）。

数据分析

使用 四参数逻辑回归（4PL） 拟合标准曲线。

样本浓度 = 计算值 × 稀释倍数（如样本稀释5倍，则结果×5）。

6. 应用领域

感染与免疫：CXCL9在病毒感染（如HCV、HIV）、结核病中高表达。

自身免疫病：类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）等Th1型疾病研究。

肿瘤免疫：评估肿瘤微环境中T细胞浸润（如黑色素瘤、肺癌）。

药物开发：监测IFN-γ相关疗法（如免疫检查点抑制剂）的疗效。

关键注意事项

? 样本处理

血清/血浆：避免溶血，离心后分装保存（-80℃长期储存）。

细胞上清：去除细胞碎片，避免反复冻融（≤3次）。

? 实验优化

若OD值超出标准曲线范围，需调整样本稀释比例。

每步孵育后充分洗涤（避免残留导致高背景）。

? 干扰因素

避免使用 （?）（抑制HRP活性）。

高脂血样本需超速离心后检测。

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。