人Lipocalin-2elisa试剂盒 新品

一、核心检测原理与技术演进：

第四代双抗夹心ELISA技术：

采用高特异性抗体对：捕获抗体（抗人Lipocalin-2单抗，表位定位25-38aa）与检测抗体（生物素化多抗，识别89-101aa）

信号放大系统：链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）复合物配合增强型TMB底物

创新防交叉设计：通过表位筛选技术，与MMP-9/NGAL复合物的交叉反应<0.5%

2025年技术升级：

新增血浆样本直接检测功能（无需去纤维蛋白原处理）

标准品改用NIST SRM 2921可溯源重组蛋白

微孔板升级为超低吸附表面（CV降低至3.8%）

二、试剂盒完整配置与存储

标准组件：

预包被96孔板（8×12可拆，独立铝箔包装）

冻干标准品（6梯度：0-1000 ng/mL，含CRM证书）

即用型检测抗体（生物素标记，4℃稳定6个月）

多功能稀释液（适用血清/血浆/尿液/脑脊液）

关键存储条件：

组分  存储温度  稳定性

未开封试剂盒  -20℃  24个月

复溶标准品  4℃  7天

酶结合物  避光4℃  3个月

显色底物  2-8℃（避光）  6个月

三、实验流程优化方案

样本处理关键点：

尿液样本：需离心（10,000×g，10分钟）后1:5稀释

血清/血浆：避免使用肝素钠抗凝（可能导致假阳性）

组织匀浆：建议添加蛋白酶抑制剂（如1mM PMSF）

标准化操作流程：

加样：标准品/样本100μL/孔（推荐使用电子移液器）

一抗孵育：37℃震荡（600rpm）90分钟

洗涤：自动洗板机5次（浸泡时间30秒/次）

二抗反应：加入检测抗体（1:200稀释），室温静置45分钟

信号检测：酶标仪双波长读取（450nm/630nm）

四、临床应用数据解读

疾病诊断临界值：

急性肾损伤：尿NGAL >150ng/mL（敏感性92%，特异性88%）

脓毒症：血清水平 >450ng/mL预示器官衰竭风险

心血管疾病：>300ng/mL与动脉粥样硬化斑块不稳定性相关

最新临床共识（2025）：

建议与KIM-1联合检测提高AKI诊断特异性

术后2小时尿NGAL水平可预测心脏手术相关AKI

在糖尿病肾病中，血清水平与eGFR呈显著负相关（r=-0.73）

五、质量控制与问题排查

必检参数标准：

标准曲线R2值≥0.995

空白孔OD值<0.12

质控品回收率应在85-115%之间

常见问题解决方案：

现象  可能原因  纠正措施

标准曲线扁平  抗体活性下降  更换新批次酶结合物

背景值过高  洗涤不充分  增加洗涤次数至7次

孔间差异大  加样不准确  校准移液器，改用反向吸液技术

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感