人Lactoferrinelisa试剂盒

人Lactoferrinelisa试剂盒

产品简介:

检测目标：人乳铁蛋白（Lactoferrin, LF）。

方法原理：双抗体夹心ELISA法（常见），少数竞争法。

适用样本：血清、血浆、乳汁、唾液、尿液、细胞培养上清等（需确认样本兼容性）。

2. 试剂盒组成

预包被板：96孔板（包被抗人LF单克隆抗体）。

标准品：重组人乳铁蛋白（浓度梯度，如0、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50、100 ng/mL）。

检测抗体：生物素或HRP标记的抗人LF二抗。

酶结合物：链霉亲和素-HRP（若使用生物素系统）。

显色底物：TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。

终止液：酸性溶液（如1M H?SO?）。

洗涤缓冲液：含Tween-20的PBS。

封闭液/样本稀释液：含BSA的缓冲液。

3. 检测原理

捕获：样本中LF与预包被抗体结合。

标记二抗：加入生物素/HRP标记的二抗，形成复合物。

信号放大：若为生物素系统，加入链霉亲和素-HRP。

显色：TMB在HRP催化下显蓝色，终止后变黄色。

定量：450nm测OD值，标准曲线计算浓度。

4. 关键参数

灵敏度：通常≤0.1 ng/mL（高灵敏度试剂盒可达pg级）。

检测范围：1.56–100 ng/mL（常见，不同品牌有差异）。

特异性：与人LF特异性结合，不与转铁蛋白等其他铁结合蛋白交叉反应。

重复性：批内CV <8%，批间CV <12%。

5. 操作流程（简要）

加样：标准品/样本加入预包被板，37℃孵育1–2小时。

洗涤：洗板3–5次，去除未结合物。

加二抗：加入标记抗体，孵育30–60分钟。

加酶：若为生物素系统，加入链霉亲和素-HRP。

显色：加入TMB，避光反应10–30分钟。

终止：加入终止液，颜色由蓝变黄。

检测：450nm读值（校正波长570/630nm）。

6. 应用领域

感染性疾病：LF作为炎症标志物（如细菌/病毒感染）。

新生儿健康：母乳中LF含量评估（抗菌和营养功能）。

自身免疫病：干燥综合征、炎症性肠病（IBD）等研究。

癌症研究：某些肿瘤（如乳腺癌）中LF表达异常。

7. 注意事项

样本处理：

血清/血浆：离心去除纤维蛋白，避免溶血。

乳汁/唾液：离心取上清，必要时稀释。

干扰因素：高脂血样本需澄清处理；避免反复冻融。

标准曲线：建议每板重复标准品，确保线性（R2≥0.99）。

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。