人HSP70elisa试剂盒 新品

产品介绍：

基本原理

HSP70 ELISA试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(Sandwich ELISA)原理：

特异性抗体预包被在微孔板上

样本中的HSP70与包被抗体结合

加入生物素标记的检测抗体形成抗体-抗原-抗体复合物

加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素

加入TMB底物显色，颜色深浅与HSP70浓度成正比

主要组成

预包被微孔板：96孔或48孔，包被抗人HSP70单克隆抗体

标准品：重组人HSP70蛋白，通常提供6-8个浓度梯度(如0、31.25、62.5、125、250、500、1000 pg/mL)

检测抗体：生物素标记的抗人HSP70抗体

酶结合物：HRP标记的链霉亲和素

显色底物：TMB(四甲基联苯胺)溶液

终止液：酸性溶液(通常为1M或2M硫酸)

洗涤缓冲液：20-25×浓缩PBS-Tween20

样本稀释液：用于稀释高浓度样本

技术参数

检测范围：通常15.6-1000 pg/mL(不同厂家略有差异)

灵敏度：最低检测限通常<10 pg/mL

特异性：可检测人HSP70，与HSP90、HSP60等无交叉反应

精密度：板内变异系数<10%，板间变异系数<15%

样本类型：血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆液

样本体积：通常需要50-100μL

总检测时间：约3-4小时(不包括样本准备时间)

操作步骤(简要)

标准品和样本加入预包被孔中，孵育

洗涤后加入生物素标记抗体，孵育

洗涤后加入酶结合物，孵育

洗涤后加入TMB底物显色

加入终止液终止反应

450nm波长读取吸光度(参考波长630nm)

应用领域

疾病研究：HSP70与肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等相关

应激反应研究：热休克、氧化应激等条件下HSP70表达变化

药物开发：评估药物对HSP70表达的影响

临床诊断：某些疾病的辅助诊断标志物

注意事项

不同批号试剂不可混用

避免反复冻融标准品和样本

严格按照说明书推荐的样本稀释比例

显色时间需严格控制

实验过程中需避免污染

使用前所有试剂需平衡至室温(18-25℃)

储存条件

未开封试剂盒通常需2-8℃保存，有效期一般为6-12个月。开封后部分组分可能需要-20℃保存。

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感