人Granzyme Belisa试剂盒 新品

检测原理：

双抗体夹心法：酶标板预先包被抗Granzyme B的捕获抗体。加入样本或标准品后，Granzyme B与固相抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-Granzyme B-生物素抗体”复合物。加入HRP标记的链霉亲和素，与生物素结合。加入底物溶液（如TMB），酶催化显色，颜色深浅与Granzyme B浓度成正比。最后加入终止液，用酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算样本中Granzyme B的浓度。

产品组成

预包被抗Granzyme B抗体的酶标板：96孔或48孔。

Granzyme B标准品：已知浓度的重组人Granzyme B，用于制作标准曲线。

生物素标记的抗Granzyme B抗体：用于检测样本中的Granzyme B。

HRP标记的链霉亲和素：与生物素抗体结合，催化底物显色。

底物溶液：如TMB，用于显色反应。

终止液：如硫酸，用于终止显色反应。

洗涤缓冲液：用于洗涤未结合的物质。

样品稀释液：用于稀释样本和标准品。

检测步骤

准备试剂和样本：将试剂盒中的试剂平衡至室温，按说明书稀释标准品和样本。

加样：在酶标板孔中加入标准品或样本，温育以使Granzyme B与固相抗体结合。

洗涤：洗去未结合的物质。

加检测抗体：加入生物素标记的抗Granzyme B抗体，温育后洗涤。

加酶标记物：加入HRP标记的链霉亲和素，温育后洗涤。

显色：加入底物溶液，避光孵育，使颜色显色。

终止反应：加入终止液，终止显色反应。

测定吸光度：使用酶标仪在450 nm波长处测定各孔的吸光度值。

计算浓度：根据标准曲线，计算样本中Granzyme B的浓度。

性能指标

检测范围：通常为15.6 pg/mL至1000 pg/mL。

灵敏度：最低检测限为3.0 pg/mL至18.75 pg/mL。

特异性：不与结构类似的其他蛋白酶交叉反应。

重复性：板内变异系数≤10%，板间变异系数≤15%。

样本处理与保存

血清/血浆：采集后尽快离心，取上清液，分装后-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片，立即检测或分装后-20℃保存。

组织样本：制备组织匀浆，离心取上清，按上述方法保存。

注意事项

避免污染：使用干净的移液器和枪头，防止交叉污染。

严格操作：按照说明书步骤操作，控制温育时间和温度。

试剂保存：未开封试剂盒储存在2-8℃，避免反复冻融。

结果解读：结合临床和其他检测结果综合判断。

应用领域

免疫学研究：研究Granzyme B在细胞毒性T细胞和NK细胞介导的免疫应答中的作用。

疾病诊断：评估Granzyme B水平与自身免疫疾病、肿瘤等的关系。

药物开发：监测药物对Granzyme B表达的影响。

试剂与样本准备阶段

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。

公司正在出售的产品：

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感