大鼠MCP-1/CCL2elisa试剂盒

产品介绍：

本试剂盒采用 双抗体夹心ELISA法，可高灵敏度、高特异性地定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其他体液中的 MCP-1/CCL2 含量。

1. 检测原理

双抗体夹心ELISA：

预包被抗体：微孔板包被抗大鼠MCP-1单克隆抗体。

样本结合：样本中的MCP-1与包被抗体结合。

检测抗体：加入生物素或HRP标记的二抗，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色）。

终止检测：加入终止液（硫酸或磷酸），450 nm测OD值，计算浓度。

试剂盒组成

组分  说明

预包被96孔板  抗大鼠MCP-1抗体包被

标准品（0-1000 pg/mL）  重组大鼠MCP-1（冻干或液体）

检测抗体  生物素/HRP标记抗大鼠MCP-1抗体

TMB显色液  3,3',5,5'-四甲基联苯胺（HRP底物）

终止液  1M/2M硫酸或磷酸

洗涤缓冲液（10×或20×）  PBS-Tween 20

样本稀释液  适用于血清/血浆/细胞上清

3. 检测范围 & 灵敏度

检测范围：15.6–1000 pg/mL（不同品牌可能略有差异）。

最低检测限（灵敏度）：<5 pg/mL。

特异性：仅检测大鼠MCP-1，不与其他趋化因子（如MCP-3、RANTES）交叉反应。

重复性：板内CV <8%，板间CV <10%。

样本要求

样本类型  处理建议

血清  室温凝固30分钟，离心（1000×g, 10 min）

血浆（EDTA/肝素）  离心去除血小板（3000 rpm, 10 min）

细胞培养上清  离心去除细胞碎片（2000 rpm, 5 min）

组织匀浆  裂解后离心（10000×g, 5 min）取上清

储存条件：短期（24h）可4℃保存，长期需-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

5. 实验流程（简要步骤）

标准品稀释：梯度稀释（0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）。

加样：标准品、样本各100 μL/孔，37℃孵育1-2小时。

洗涤：洗板3-5次（300 μL/孔洗涤液）。

加检测抗体：100 μL/孔，37℃孵育1小时。

加酶标二抗（如适用）：HRP-Streptavidin（若使用生物素系统）。

显色：加TMB 100 μL/孔，避光反应15-30分钟。

终止：加终止液50 μL/孔。

应用领域

炎症研究：评估感染、自身免疫疾病（如类风湿关节炎）模型中的MCP-1水平。

心血管疾病：动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤中的单核细胞浸润。

神经炎症：阿尔茨海默病、多发性硬化等神经退行性疾病模型。

肿瘤微环境：检测肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）募集情况。

7. 注意事项

避免污染：使用无热原、无酶污染的耗材。

标准曲线：每次实验需重新绘制，避免批次差异。

样本稀释：高浓度样本需预实验确定最佳稀释倍数。

复孔检测：建议每个样本做2-3个复孔，提高准确性。

ELISA试剂盒的主要优点缺点

维度  优势 (Pros) 劣势 (Cons)

检测性能   灵敏度极高，特异性强，结果准确  可能存在交叉反应，易受干扰物影响

操作体验   流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测   步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求

经济成本   适合大批量样本检测，长期看性价比尚可   单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异

应用范围   可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本   对样本质量（如是否溶血）敏感

公司正在出售的产品：

温度平衡（最容易被忽视的点）

 操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。

后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。

试剂配制

洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。

现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。

样本处理

避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。

离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。

稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。