大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

产品简介:

大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β) ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其他生物液体样本中TNF-β浓度的科研工具，广泛应用于炎症、免疫、肿瘤等相关研究。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术——

微孔板预包被抗TNF-β抗体，与样本中的TNF-β结合。

加入酶标检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

洗涤后加入底物（如TMB），显色，颜色深浅与TNF-β浓度呈正相关。

用酶标仪在450 nm波长测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本浓度。

2. 检测范围与灵敏度

检测范围常见为1 pg/ml-100 pg/ml或更宽，灵敏度可达1 pg/ml或更高。

部分试剂盒检测下限可达2.72 pg/mL。

3. 样本处理及要求

血清：室温静置2小时或4℃过夜，离心取上清，避免溶血。

血浆：EDTA或柠檬酸钠抗凝，离心后取上清。

组织匀浆：用PBS研磨匀浆，离心取上清。

细胞培养上清：离心去除细胞碎片，取上清检测。

所有样本建议-20℃保存，避免反复冻融。

4. 试剂盒组成

常见组分包括：

预包被TNF-β抗体的微孔板

酶标检测抗体

标准品（冻干品或液体）

洗涤液、显色剂（TMB）、终止液

样品稀释液、封板膜、说明书等

5. 实验步骤简要

标准品和样本加样：设标准品孔和样本孔，每孔加样50-100μl。

温育：37℃孵育30-60分钟。

洗涤：弃去液体，洗涤5次，拍干。

显色：每孔加底物溶液，37℃避光显色10-15分钟。

终止：加终止液，溶液变为黄色。

读数：酶标仪450 nm测定OD值，计算浓度。

6. 注意事项

试剂盒2-8℃保存，勿冷冻，避免反复冻融。

样本收集后尽早检测，避免降解。

洗涤液有结晶时，可温水助溶。

避免交叉污染和主观误差，建议做复孔。

仅用于科研，不用于临床诊断。

应用与服务

该试剂盒广泛应用于生物医学研究领域，如机制研究、疾病标志物检测等。部分厂家提供免费代测服务和专业技术支持，方便用户获得准确可靠的实验结果。

操作要点：

需严格遵守试剂盒说明书操作，建议做复孔及标准曲线。

洗涤过程至关重要，洗涤不充分会影响结果准确性。

所有试剂使用前需恢复至室温，避免批号混用。

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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

注意事项

试剂盒组分应按说明储存，使用前平衡至室温。

实验中需避免交叉污染，建议使用一次性吸头。

充分混匀对实验结果至关重要。

试剂盒仅供研究使用，不可用于临床诊断。

显色液需避光保存，终止液为2M硫酸，操作时需安全防护。