Recombinant Human UBA5 新品

操作要点：

电泳条件：使用15% SDS-PAGE凝胶，以提高对小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。

?转膜参数：采用湿转法，100 V、60–90分钟（4°C），使用PVDF膜（需甲醇预活化）。

?抗体选择：

一抗：抗CST3多克隆抗体（如兔源抗体），推荐稀释比为1:1000。

二抗：HRP标记的山羊抗兔IgG，稀释比1:10,000。

?显色方式：ECL化学发光法，预期条带位于?~13.4 kDa?处。

?内参建议：由于CST3分子量较小，可选用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作为内参，避免条带重叠。

产品概述：

该蛋白是UFMylation级联反应的关键E1激活酶（泛素折叠修饰酶）。其核心功能是作为该修饰途径的起始因子，在ATP存在下特异性地识别并激活泛素样蛋白Ufm1，通过形成UBA5-Ufm1硫酯键中间体，将Ufm1传递给E2结合酶（UFC1），进而参与下游底物蛋白（如DDRGK1）的修饰。这一过程对于维持内质网（ER）稳态、调控未折叠蛋白反应（UPR）及神经元发育至关重要。研究表明，UBA5基因的功能缺失突变会导致严重的神经发育缺陷，引发以发育迟缓、癫痫为特征的脑病。因此，重组人UBA5是探索罕见病致病机制

别名

5730525G14Rik, AW240750, FLJ23251, FLJ23251UBA5, MGC105565, ThiFP1, UBA5, UBA5 ubiquitin activating enzyme E1 homolog, UBA5_HUMAN, UBE1DC, UBE1DC1, Ubiquitin activating enzyme 5, Ubiquitin activating enzyme E1 domain containing 1, Ubiquitin activating enzyme E1 domain containing protein 1, Ubiquitin like modifier activating enzyme 5, Ubiquitin-activating enzyme 5

宿主; E.Coli

表达区间; 197-404

分子量; 43.6 kDa

标签; N-terminal His-IF2DI Tag

纯度; Greater than 90% by SDS-PAGE gel analyses

应用; Western Blot, ELISA

性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.

使用说明：

复溶方法: 使用无菌蒸馏水或PBS缓冲液（pH 7.4）溶解冻干粉，轻轻混匀至完全溶解。

?应用建议:

?实验用途: 适用于Western Blot、ELISA等检测，作为抗原或标准品。

?浓度调整: 根据实验需求稀释，避免高浓度导致非特异性结合。

?安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜，遵循实验室生物安全规范。

重组表达原理：

基因克隆：从牛基因组中获取CST3基因的编码序列（对应氨基酸31–148），插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。

?宿主表达：将重组质粒转化至E. coli（如BL21菌株），在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高，适合大规模生产。

?蛋白纯化：利用His标签与镍柱亲和层析结合，实现高纯度（>95%）蛋白回收，再经透析或凝胶过滤去除杂质。

?冻干保存：加入海藻糖作为保护剂，冻干后可长期稳定储存，复溶后保持天然构象和生物活性。

公司正在出售的产品：

通常包括以下几个核心步骤：

基因克隆：首先，科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列（目的基因）。

构建载体：将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中，这个载体就像是一个运输工具，

能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。

转入宿主：将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中，这个过程称为“转化”或“转染”。

表达与培养：宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养，其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息，开始大量生产目标蛋白。

纯化：通过一系列复杂的生物化学方法（如层析技术），将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来，以获得高纯度的产品。