Recombinant Human TDP2 新品

操作要点：

电泳条件：使用15% SDS-PAGE凝胶，以提高对小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。

?转膜参数：采用湿转法，100 V、60–90分钟（4°C），使用PVDF膜（需甲醇预活化）。

?抗体选择：

一抗：抗CST3多克隆抗体（如兔源抗体），推荐稀释比为1:1000。

二抗：HRP标记的山羊抗兔IgG，稀释比1:10,000。

?显色方式：ECL化学发光法，预期条带位于?~13.4 kDa?处。

?内参建议：由于CST3分子量较小，可选用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作为内参，避免条带重叠。

产品概述：

重组人TDP2（酪氨酸DNA磷酸二酯酶2）是一种关键的DNA修复酶，主要负责修复由拓扑异构酶II（TOP2）毒素（如依托泊苷等化疗药物）引起的DNA双链断裂。它能够特异性地水解5'-磷酸酪氨酸键，从而移除与DNA共价结合的“被困”拓扑异构酶II，保护基因组的稳定性。该酶属于外切酶/内切酶/磷酸二酯酶（EEP）家族，其催化活性依赖于镁离子。除了在细胞核中的主要定位外，研究还发现其存在定位于线粒体的同工型（如TDP2S），参与线粒体DNA的修复过程。TDP2的功能缺失与一种名为脊髓小脑性共济失调23型（SCA

别名

5'-Tyr-DNA phosphodiesterase, 5'-tyrosyl-DNA phosphodiesterase, AD 022, AD022, dJ30M3.3, EAP 2, EAP II, EAP2, EAPII, ETS 1 associated protein 2, ETS 1 associated protein II, ETS1 associated protein 2, ETS1 associated protein II, ETS1-associated protein 2, ETS1-associated protein II, MGC111021, MGC9099, RP1-30M3.3, tdp2, TRAF and TNF receptor associated protein, TRAF and TNF receptor-associated protein

宿主; E.Coli

表达区间; 1-362

分子量; 39.7 kDa

标签; N-terminal His Tag

纯度; Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses

应用; Western Blot, ELISA

性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.

使用说明：

复溶方法: 使用无菌蒸馏水或PBS缓冲液（pH 7.4）溶解冻干粉，轻轻混匀至完全溶解。

?应用建议:

?实验用途: 适用于Western Blot、ELISA等检测，作为抗原或标准品。

?浓度调整: 根据实验需求稀释，避免高浓度导致非特异性结合。

?安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜，遵循实验室生物安全规范。

重组表达原理：

基因克隆：从牛基因组中获取CST3基因的编码序列（对应氨基酸31–148），插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。

?宿主表达：将重组质粒转化至E. coli（如BL21菌株），在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高，适合大规模生产。

?蛋白纯化：利用His标签与镍柱亲和层析结合，实现高纯度（>95%）蛋白回收，再经透析或凝胶过滤去除杂质。

?冻干保存：加入海藻糖作为保护剂，冻干后可长期稳定储存，复溶后保持天然构象和生物活性。

公司正在出售的产品：

通常包括以下几个核心步骤：

基因克隆：首先，科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列（目的基因）。

构建载体：将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中，这个载体就像是一个运输工具，

能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。

转入宿主：将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中，这个过程称为“转化”或“转染”。

表达与培养：宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养，其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息，开始大量生产目标蛋白。

纯化：通过一系列复杂的生物化学方法（如层析技术），将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来，以获得高纯度的产品。