大鼠肾集合管上皮细胞
产品信息:
产品名称 大鼠肾集合管上皮细胞
组织来源 正常肾脏组织
种属 大鼠
产品规格 5×10^5Cells/T25
英文名称 | Primary renal collecting duct epithelial cells in rats | 规格 | 5×105 |
细胞形态 | 铺路石状细胞,不规则细胞 | 货号 | P-X1601 |
细胞简介:
细胞详述
集合管是由皮质走向髓质椎体孔的小管,沿途有许多肾单位的远曲小管与之相连,管径逐渐变粗,管壁逐渐变厚,管壁由柱状上皮构成。
集合管流的是小管液,肾脏血液经肾小球滤过,形成的原尿,进入肾小管后就称为小管液,小管液流向集合管进一步滤过和重吸收形成终尿。
细胞特性
1) 组织来源于实验动物的正常肾脏组织。
2) 细胞鉴定:细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式:铺路石状细胞,不规则细胞,贴壁培养。
推荐培养基:
推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂。
产品定义:
大鼠肾集合管上皮细胞是构成大鼠肾脏集合管的上皮细胞,主要为主细胞和闰细胞。主细胞可重吸收钠离子和水,分泌钾离子;闰细胞可分泌氢离子,参与肾脏的酸碱平衡调节,同时也参与尿液的浓缩和稀释过程,是研究肾脏功能、肾功能衰竭及肾脏疾病机制的重要细胞模型。
细胞培养指南:
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
复苏的原则
快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。
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通用注意事项:
无菌操作:所有操作全程在超净台内进行,定期对超净台、培养箱进行消毒,使用无菌的培养基、血清、试剂
细胞状态监测:每天观察细胞形态、密度、颜色变化,记录生长情况,若发现细胞出现污染、形态异常、生长缓慢等问题,及时处理
培养基更换:原代细胞培养初期每2-3天更换一次培养基,传代后每1-2天更换一次,根据培养基颜色变化(变黄表示营养耗尽)灵活调整
避免过度操作:原代细胞较为脆弱,避免频繁吹打、离心,尽量减少对细胞的机械损伤
冻存备份:原代细胞分离成功后,及时冻存部分细胞作为备份,冻存液使用90%血清+10%DMSO,采用梯度降温法冻存