猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型(PRRSV-US)RNA核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于猪场蓝耳病的快速监测，特别适用于缺乏荧光定量PCR仪的基层实验室或需要进行现场快检的场景。它能够特异性地检测美洲型PRRSV（Type 2），通常不与欧洲型（Type 1）或其他猪病病毒发生交叉反应。

 �� 产品核心信息

检测对象：猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型（PRRSV-US/Type 2）RNA。

检测原理：恒温荧光法（通常为RT-LAMP或RT-RAA）。

针对PRRSV美洲型的保守基因区域（如ORF7或Nsp2基因）设计特异性引物和探针。

荧光信号：通过荧光强度的变化（如FAM通道）判断结果，部分试剂盒支持肉眼观察（如添加显色剂后观察颜色变化）。

适用仪器：

荧光判读：恒温荧光检测仪（如Genie系列、ESE Quant等）或具备恒温程序的荧光定量PCR仪。

肉眼判读：恒温水浴锅或金属浴（仅需观察颜色变化）。

检测样本：猪血清、抗凝全血、组织（肺脏、脾脏、淋巴结）匀浆液、口腔拭子或精液。

�� 试剂盒组成（以48T为例）

组分名称  规格  作用说明

恒温反应液  500 μL x 1管  含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺、逆转录酶（RT）、Bst DNA聚合酶（LAMP）等

引物/探针混合液  100 μL x 1管  含PRRSV-US特异性引物和荧光探针（若为肉眼法，则不含探针）

阳性对照  50 μL x 1管  含PRRSV-US目标基因片段的质粒或体外转录RNA

阴性对照  250 μL x 1管  无RNA酶水（RNase-free Water）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与RNA提取

组织/全血样本：取肺脏、淋巴结或抗凝全血约20 mg/μL，加入500 μL生理盐水或裂解液，匀浆。

RNA提取：

取200 μL匀浆液，使用病毒RNA提取试剂盒（离心柱法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱RNA。

快速法：部分试剂盒支持直接煮沸法（100℃加热10分钟，离心取上清作为模板）。

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：无荧光信号增强（曲线呈直线），或肉眼观察颜色无变化（如无绿色荧光或溶液不变蓝）。

阳性对照 (PC)：荧光信号迅速增强（Ct值通常≤15-20），或肉眼观察颜色发生明显变化（如出现绿色荧光或溶液变蓝）。

2. 样本判定

阳性 (+)：荧光扩增曲线呈明显的“S”型，且 Ct值 ≤ 20-25（或肉眼观察到明显的阳性颜色变化）。表明样本中含有PRRSV美洲型病毒。

阴性 (-)：无荧光信号增强（Ct值≥30），或肉眼观察无颜色变化。

可疑 (±)：扩增曲线不典型或Ct值在临界范围内。建议复检。

⚠️ 注意事项

防污染：恒温扩增极易产生气溶胶污染，导致假阳性。必须严格分区操作，加样时尽量避免产生气泡。

酶活性：逆转录酶和Bst酶对温度敏感，配制体系时务必在冰上操作，且加完模板后应尽快放入预热的仪器中。

样本质量：组织样本中可能含有抑制物（如血红素、多糖），建议使用高质量的RNA提取试剂盒，并设置内参对照（若试剂盒包含）。

临床意义：检测结果需结合猪的临床症状（如发热、呼吸困难、耳朵发绀等）及流行病学背景进行综合判断。阳性结果需送实验室用qPCR或病毒分离进行最终确诊。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。