猪圆环病毒2型（PCV-2）核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于猪圆环病毒2型（PCV-2）的快速检测，适用于基层兽医站、养猪场或不具备荧光定量PCR仪的实验室。

该方法通常基于环介导等温扩增（LAMP）或重组酶介导等温扩增（RAA）技术，具有操作简便、反应速度快（通常30-60分钟）、对仪器要求低（仅需恒温设备）等优势。

 �� 产品核心信息

检测对象：猪圆环病毒2型（PCV-2）DNA。

检测原理：恒温荧光法（通常为荧光LAMP或荧光RAA）。

针对PCV-2基因组的保守区域（如Cap蛋白基因或Rep基因）设计特异性引物（LAMP需4-6条引物）或引物/探针（RAA）。

荧光信号：反应过程中，随着靶标DNA的扩增，荧光信号会同步增强。

适用仪器：

扩增仪：恒温荧光PCR仪（如ESE Quant tubescanner、OptiGene、Genie系列等）或普通梯度PCR仪（设定恒温程序）。

水浴锅/金属浴：部分肉眼判读的试剂盒仅需恒温设备。

检测样本：猪全血（抗凝）、血清、组织（淋巴结、脾脏、肺脏、肾脏）匀浆液、粪便等。

�� 试剂盒组成（以48T为例）

组分名称  规格  作用说明

恒温扩增反应液  500 μL x 1管  含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺、Bst DNA聚合酶（LAMP）或重组酶（RAA）等

引物/探针混合液  100 μL x 1管  含PCV-2特异性引物（LAMP）或引物+探针（RAA）

阳性对照  50 μL x 1管  含PCV-2目标基因片段的质粒或假病毒

阴性对照  250 μL x 1管  无DNA酶水（ddH₂O）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与DNA提取

组织/全血样本：取组织（淋巴结、脾脏等）或抗凝全血约20 mg/μL，加入500 μL生理盐水或裂解液，匀浆。

DNA提取：

取200 μL匀浆液，使用病毒DNA提取试剂盒（离心柱法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱DNA。

快速法：部分试剂盒支持直接煮沸法（100℃加热10分钟，离心取上清作为模板）。

2. 反应体系配制（冰上操作）

总体系：25 μL（具体体积视说明书而定）。

配制表：

试剂  体积

恒温扩增反应液  12.5 μL

引物/探针混合液  2 μL

模板DNA  2-5 μL

ddH₂O  补足至25 μL

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：无荧光信号增强，扩增曲线呈直线（无Ct值或Ct值≥设定阈值）。

阳性对照 (PC)：荧光信号明显增强，扩增曲线呈典型的“S”型，且Ct值 ≤ 15-20（恒温法扩增极快）。

2. 样本判定

阳性 (+)：荧光扩增曲线呈明显的“S”型，且 Ct值 ≤ 20-25。表明样本中含有PCV-2病毒。

阴性 (-)：无荧光信号增强，或Ct值 ≥ 30。

可疑 (±)：扩增曲线不典型或Ct值在临界范围内。建议复检。

⚠️ 注意事项

防污染：恒温扩增效率极高，极易受气溶胶污染。必须严格分区操作，加样时尽量避免产生气泡。

酶活性：恒温法所用酶（如Bst酶）对温度敏感，配制体系时务必在冰上操作，且加完模板后应尽快放入预热的仪器中。

样本质量：组织样本中可能含有抑制物（如血红素、多糖），建议使用高质量的DNA提取试剂盒。

临床意义：PCV-2是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原。检测结果需结合猪的临床症状（如消瘦、呼吸困难、腹泻等）及流行病学背景进行综合判断。阳性结果需送实验室用qPCR或病毒分离进行最终确诊。

公司正在出售的产品：

注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。