猪伪狂犬病毒(PRV)核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

产品介绍：

该试剂盒主要用于猪伪狂犬病毒的快速检测，特别适用于不具备复杂PCR实验室条件的猪场、基层兽医站或屠宰场等场景。

与传统的荧光定量PCR法相比，恒温荧光法（通常基于LAMP或RAA原理）无需复杂的热循环设备，具有操作简便、速度快的特点。

 �� 产品核心信息

检测对象：猪伪狂犬病毒（Porcine Pseudorabies Virus, PRV），又称猪疱疹病毒I型。

检测原理：恒温荧光扩增技术（通常为环介导恒温扩增法 LAMP 或 重组酶介导的等温扩增法 RAA）。该技术利用多组特异性引物识别靶序列上的多个位点，在恒定温度（通常为60-65℃）下进行核酸扩增，并通过荧光染料实时监测扩增过程。

灵敏度与特异性：

高灵敏度：最低检测限通常可达 1×10³ copies/mL（部分产品可达100拷贝/mL）。

高特异性：特异性≥99%，不会与其他猪源病原（如猪瘟病毒、圆环病毒等）发生交叉反应。

适用样本：猪的全血、血清、鼻拭子、扁桃体、脑组织、肺组织等。

适用仪器：恒温荧光检测仪（如Genie II、YR-820等专用设备）或具有恒温扩增功能的荧光定量PCR仪。

�� 产品组成与规格

组分名称  规格示例  说明

反应液A (Reagent A)  1100 μL (管)  含引物混合物、缓冲液、dNTPs等核心成分。

反应液B (Enzyme B)  50 μL (管)  含Bst DNA聚合酶（LAMP）或重组酶混合物（RAA），需-20℃保存。

阳性对照 (Positive Control)  100 μL (管)  含PRV目标基因片段的质粒或灭活病毒DNA。

阴性对照 (Negative Control)  100 μL (管)  无菌双蒸水或缓冲液。

C-I (荧光增强液)  1000 μL (管)  部分产品包含，用于增强荧光信号。

�� 操作流程简述

样本采集与处理：

血液样本：采集抗凝血（EDTA抗凝）或血清。

组织样本：取脑、肺、扁桃体或脾脏，加入生理盐水研磨制成10%匀浆，离心取上清。

拭子样本：鼻拭子或咽拭子需在病毒保存液中充分震荡洗脱。

DNA提取：

使用商用基因组DNA提取试剂盒（柱提法/磁珠法）提取样本中的总DNA。

关键点：PRV是DNA病毒，无需逆转录步骤。

试剂准备与加样：

将反应液和酶液在冰上解冻并充分混匀，离心30秒。

按说明书比例配制反应体系（通常为25-50 μL），向反应管中加入提取的DNA模板（通常2-5 μL）。

必须设置：阴性对照（无菌水）和阳性对照（试剂盒提供）。

恒温扩增：

将反应管放入恒温荧光检测仪中。

推荐程序：

反应温度：63℃（具体以说明书为准，RAA法可能为37-42℃）；

反应时间：30-60分钟。

结果判读：

阳性（+）：反应管内出现典型的“S”型扩增曲线，且仪器自动判定为阳性。

阴性（-）：无扩增曲线，或仪器判定为阴性。

质控要求：阳性对照应出现明显的扩增曲线，阴性对照应无扩增曲线。

⚠️ 注意事项与安全提示

严格分区操作：为防止气溶胶污染导致假阳性，实验必须严格分区（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），且各区物品专用。

试剂保存：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存。酶混合物对温度敏感，应避免反复冻融。

临床意义：伪狂犬病毒可引起母猪繁殖障碍、仔猪神经症状和高死亡率。早期快速检测有助于及时隔离病猪、净化猪群，特别是区分野毒感染（gE基因）与疫苗免疫（gB基因）具有重要意义（具体取决于试剂盒设计）。

废弃物处理：反应结束后，严禁开盖，以免扩增产物（含荧光染料和DNA）污染环境。应将反应管密封后作为生物废弃物处理。

公司正在出售的产品：

PCR（聚合酶链式反应）是一种基因扩增技术，

用于检测或定量特定DNA/RNA序列。其核心是通过温度循环（变性、退火、延伸）扩增目标基因片段，而非培养生物体。

关键点：

无需培养：PCR直接检测样本中的核酸，无需预先培养微生物或细胞。

应用场景：病原体检测（如病毒、细菌）、基因表达分析、遗传病诊断等。