折光马尔太虫核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于贝类（如牡蛎、贻贝等）养殖和检疫领域，针对折光马尔太虫（Marteilia refringens）进行高灵敏度、高特异性的检测。

折光马尔太虫是严重危害双壳贝类的寄生虫，可导致贝类大量死亡。该试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过检测病原体的特异性基因序列实现精准诊断。

 �� 产品核心信息

检测对象：折光马尔太虫（Marteilia refringens）DNA。

检测原理：TaqMan荧光探针法（qPCR）。针对折光马尔太虫的基因组保守序列（如18S rRNA或ITS区域）设计特异性引物和探针。

荧光通道：通常为 FAM 通道（具体视试剂盒品牌而定）。

适用仪器：ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96、罗氏480等实时荧光定量PCR仪。

检测样本：贝类（牡蛎、贻贝等）的消化腺、鳃组织匀浆液或环境水体样本。

�� 试剂盒组成（以50次为例）

组分名称  规格  作用说明

2×qPCR Magic Mix  500 μL x 1管  含dNTPs、热启动Taq酶、Mg²⁺、缓冲液及UNG酶（防污染）

Primers & Probe Mix  100 μL x 1管  含折光马尔太虫特异性引物和FAM标记的探针

阳性对照 (PC)  50 μL x 1管  含折光马尔太虫目标基因片段的质粒DNA（通常浓度为1×10⁸ copies/μL）

阴性对照 (NC)  250 μL x 1管  无DNA酶水（ddH₂O）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与DNA提取

组织样本：取贝类消化腺或鳃组织约20 mg，加入180 μL生理盐水或裂解液，匀浆。

DNA提取：

取200 μL匀浆液，使用基因组DNA提取试剂盒（如离心柱法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱DNA。

关键点：提取的DNA应避免反复冻融，建议分装保存于-20℃。

2. 反应体系配制（冰上操作）

总体系：20 μL（具体体积视说明书而定）。

配制表：

试剂  体积

2×qPCR Magic Mix  10 μL

Primers & Probe Mix  1 μL

模板DNA  2-5 μL

ddH₂O  补足至20 μL

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：FAM通道无扩增曲线（Ct值未定义或≥40）。

阳性对照 (PC)：FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线，且Ct值 ≤ 30。

2. 样本判定

阳性 (+)：FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有折光马尔太虫。

可疑 (±)：Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检，若复测Ct值 < 35则判为阳性。

阴性 (-)：FAM通道无扩增曲线，或Ct值 ≥ 40。

⚠️ 注意事项

防污染：必须严格实行分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。阳性对照应单独存放和使用。

探针保护：荧光探针对光敏感，使用和保存过程中应避光。

临床意义：检测结果需结合贝类的临床症状（如消瘦、闭壳无力、消化腺颜色异常等）及流行病学背景进行综合判断。

生物安全：阳性对照含有病原基因片段，操作时应视为具有潜在生物危害性，废弃物需高压灭菌处理。

公司正在出售的产品：

注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。