罗湖病毒（TiLV）RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于罗非鱼养殖业，针对罗湖病毒（Tilapia Lake Virus, TiLV）进行高灵敏度、高特异性的检测，帮助养殖户和检测机构预警“罗非鱼夏末死亡综合征”。

该试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术（qRT-PCR），能够实现病毒的早期诊断和精准定量。

 �� 产品核心信息

检测对象：罗湖病毒（TiLV）RNA。

检测原理：一步法RT-qPCR（TaqMan荧光探针法）。针对TiLV基因组的保守区域（如Segment 1或衣壳蛋白基因）设计特异性引物和探针。

荧光通道：FAM（检测TiLV靶基因）。部分试剂盒可能包含内参基因（如罗非鱼β-actin）检测通道（如VIC/HEX）。

适用仪器：ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等实时荧光定量PCR仪。

检测样本：罗非鱼的脑组织、脾脏、肾脏、鳃或体液匀浆液。

�� 试剂盒组成（以48T为例）

组分名称  规格  作用说明

2×qRT-PCR Mix  500 μL x 1管  含dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq酶、逆转录酶、缓冲液

TiLV Primers & Probe  100 μL x 1管  含TiLV特异性引物和FAM标记的探针

阳性对照 (PC)  50 μL x 1管  含TiLV目标基因片段的质粒或体外转录RNA

阴性对照 (NC)  250 μL x 1管  无RNA酶水（RNase-free Water）

�� 操作流程详解

1. 样本处理与RNA提取

组织样本：取罗非鱼脑、脾脏或肾脏组织约20-50 mg，加入500 μL生理盐水或裂解液，使用组织研磨器制备匀浆。

RNA提取：

取200 μL匀浆液，使用病毒RNA提取试剂盒（如离心柱法或磁珠法）进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱RNA。

关键点：操作全程需在冰上或4℃环境下进行，防止RNA降解。使用无RNA酶的耗材。

2. 反应体系配制（冰上操作）

总体系：20 μL。

配制表：

试剂  体积

2×qRT-PCR Mix  10 μL

TiLV Primers & Probe  1 μL

模板RNA  2-5 μL

RNase-free Water  补足至20 μL

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：FAM通道无扩增曲线（Ct值未定义或≥40）。

阳性对照 (PC)：FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线，且Ct值 ≤ 30。

2. 样本判定

阳性 (+)：FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有TiLV病毒。

可疑 (±)：Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检，若复测Ct值 < 35则判为阳性。

阴性 (-)：FAM通道无扩增曲线，或Ct值 ≥ 40。

⚠️ 注意事项

防污染：必须严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区）。阳性对照应单独存放，避免气溶胶污染导致假阳性。

RNA酶防护：TiLV是RNA病毒，极易降解。操作时必须佩戴口罩、手套，使用无RNA酶的耗材。

生物安全：阳性对照含有病毒基因片段，操作时应视为具有潜在传染性，需在生物安全柜内操作。

临床意义：检测结果需结合罗非鱼的临床症状（如眼球突出、体色发黑、腹部肿胀、溃烂等）进行综合判断。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。