对虾肝胰腺细小病毒（HPV）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

 产品介绍：

该试剂盒主要用于对虾养殖业中，针对对虾肝胰腺细小病毒病（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis, IHHN）进行快速、精准的检测。

该病毒主要侵袭对虾的肝胰腺和造血组织，导致幼虾畸形（如“矮小残缺症”）和成虾生长缓慢。

 �� 产品核心信息

检测对象：对虾肝胰腺细小病毒（Hepatopancreatic Parvovirus, HPV），即传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）。

检测原理：TaqMan荧光探针法（qPCR）。针对HPV的保守基因序列（如非结构蛋白NS1或衣壳蛋白VP基因）设计特异性引物和探针，通过荧光信号累积实时监测扩增过程。

适用仪器：ABI 7500、LightCycler系列、Bio-Rad CFX96、杭州博日系列等实时荧光定量PCR仪。

检测样本：对虾肝胰腺、鳃组织、血淋巴或虾苗匀浆液。

�� 试剂盒组成（以50次为例）

组分名称  规格  作用说明

2×Probe qPCR Magic Mix  500 μL x 1管  预混液，含dNTPs、Taq酶、缓冲液、Mg²⁺等

HPV引物混合液  100 μL x 1管  含HPV特异性上下游引物

HPV探针 (Probe)  50 μL x 1管  FAM标记的特异性荧光探针

阳性对照 (PC)  50 μL x 1管  含HPV目标基因片段的质粒DNA（1×10⁸拷贝/μL）

模板稀释液  1 mL x 1管  用于稀释阳性对照或样本DNA

�� 操作流程详解

1. 样本处理与DNA提取

组织样本：取对虾肝胰腺或鳃组织约20 mg，加入180 μL生理盐水或缓冲液，匀浆。

DNA提取：

取200 μL匀浆液，使用磁珠法或离心柱法基因组DNA提取试剂盒进行提取。

洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱DNA。

注意：提取的DNA应避免反复冻融，建议分装保存。

2. 反应体系配制（冰上操作）

总体系：20 μL。

配制表：

试剂  体积

2×Probe qPCR Magic Mix  10 μL

HPV引物混合液  0.5 μL

HPV探针  0.5 μL

模板DNA  5 μL

ddH₂O  补足至20 μL

�� 结果判读标准

1. 质控标准

阴性对照 (NC)：FAM通道无扩增曲线（Ct值未定义或≥40）。

阳性对照 (PC)：FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线，且Ct值 ≤ 30。

2. 样本判定

阳性 (+)：FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有HPV病毒。

可疑 (±)：Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检，若复测Ct值 < 35则判为阳性。

阴性 (-)：FAM通道无扩增曲线，或Ct值 ≥ 40。

⚠️ 注意事项

国家标准：该检测方法参考GB/T 40255-2021《对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程 PCR检测法》进行，确保检测结果的权威性和准确性。

防污染：必须严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区）。阳性对照应单独存放，避免气溶胶污染导致假阳性。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。