哈维氏弧菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

产品介绍：

该试剂盒主要用于水产养殖领域（如对虾、鱼类），用于检测哈维氏弧菌（Vibrio harveyi），这是一种能引起水产动物“发光病”、“红体病”及皮肤溃疡的重要致病菌。

相比传统的培养法或普通PCR，荧光探针法（通常指TaqMan探针）具有特异性更强、灵敏度更高、且可定量的优势。

 �� 产品核心信息

检测对象：哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）。

检测原理：实时荧光定量PCR（qPCR），采用TaqMan荧光探针技术。试剂盒利用特异性引物和探针靶向哈维氏弧菌的保守基因序列（如毒力相关基因 toxR 或发光系统调控基因 luxR）进行扩增。在扩增过程中，探针被水解，荧光基团与淬灭基团分离，发出荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度来判断样本中是否含有该菌。

灵敏度与特异性：

高灵敏度：最低检测限通常可达 10³ copies/mL（部分产品可达100-500拷贝/mL），显著高于传统培养法。

高特异性：不会与其他常见的弧菌或链球菌发生交叉反应。

适用样本：病灶组织（肝胰腺、鳃）、水体样本、饲料及粪便等。

适用仪器：适用于主流的荧光定量PCR仪，如ABI 7500、LightCycler 480、CFX 96等。

�� 产品组成与规格

组分名称  规格示例  说明

qPCR反应液  预混液（含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺）  部分产品将引物探针单独分装，部分为预混好的2×MIX。

酶混合物 (Enzyme)  100 μL (红盖)  含Taq DNA聚合酶和UNG酶（防污染酶），需-20℃保存。

阳性对照 (Positive Control)  50 μL (黄盖)  含哈维氏弧菌目标基因片段的质粒或DNA，用于验证试剂有效性。

阴性对照 (Negative Control)  1 mL (绿盖)  无菌双蒸水或缓冲液，用于监控实验过程是否被污染。

引物/探针混合液  100 μL (白盖)  针对 toxR 或 luxR 基因设计的特异性引物和探针。

�� 操作流程简述

样本采集与处理：

组织样本：取患病动物的病灶组织（如肝胰腺、鳃）进行匀浆。

水体样本：取10-100mL养殖水过滤浓缩，收集菌体。

增菌培养（可选）：将样本接种至TYE液体培养基中培养24小时，以提高检出率。

DNA提取：

使用试剂盒或商用DNA提取试剂盒（柱提法/磁珠法）提取样本中的基因组DNA。

关键点：DNA纯度直接影响扩增效率，需避免抑制物残留。

试剂准备与加样：

将反应液、酶液、引物探针在冰上解冻并充分混匀，离心30秒。

按说明书比例配制反应体系（通常为20-50 μL），向反应管中加入提取的DNA模板（通常5-10 μL）。

必须设置：阴性对照（无菌水）和阳性对照（试剂盒提供）。

上机扩增：

将反应管放入荧光定量PCR仪。

推荐程序（以ABI 7500为例）：

预变性：95℃ 5分钟；

循环反应：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（在此步收集荧光），进行40-45个循环。

结果判读：

阳性（+）：Ct值 < 38，且扩增曲线呈现明显的指数增长期（典型的"S"型曲线）。

可疑（±）：Ct值在 38-40 之间，建议重新采样复测。

阴性（-）：无Ct值或Ct值 ≥ 40，且无扩增曲线。

质控要求：阳性对照Ct值应≤35，阴性对照应无扩增曲线，否则实验视为无效。

⚠️ 注意事项与安全提示

严格分区操作：为防止气溶胶污染导致假阳性，实验必须严格分区（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），且各区物品专用。

试剂保存：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存。酶混合物对温度敏感，应避免反复冻融（建议分装保存）。

防污染处理：反应体系中若含有dUTP和UNG酶，可在反应前进行50℃保温，以降解可能存在的污染性扩增产物。

废弃物处理：反应结束后，严禁开盖，以免扩增产物（含荧光染料和DNA）污染环境。应将反应管密封后作为生物废弃物处理。

临床意义：哈维氏弧菌是水产养殖中的重要条件致病菌，常在水环境恶化或虾体免疫力下降时爆发。早期检测有助于及时采取消毒、调水或投喂抗菌药饵等措施。

公司正在出售的产品：

PCR（聚合酶链式反应）是一种基因扩增技术，

用于检测或定量特定DNA/RNA序列。其核心是通过温度循环（变性、退火、延伸）扩增目标基因片段，而非培养生物体。

关键点：

无需培养：PCR直接检测样本中的核酸，无需预先培养微生物或细胞。

应用场景：病原体检测（如病毒、细菌）、基因表达分析、遗传病诊断等。