对虾杆状病毒（BP）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 新品

�� 产品核心信息：

该试剂盒主要用于对虾养殖业中杆状病毒病的早期诊断与监测，基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，能够实现高灵敏度和高特异性的检测。

 检测对象：对虾杆状病毒（Baculovirus penaei, BP），该病毒主要感染对虾的肝胰腺、中肠等组织，是导致对虾养殖业损失的重要病原之一。

检测原理：实时荧光定量PCR法（qPCR），采用TaqMan荧光探针技术。试剂盒利用特异性引物和探针靶向BP基因组中的保守区域（如ORF1b、gp116或polyhedrin基因）进行扩增。在扩增过程中，探针被Taq酶水解，释放荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度的变化，实现病毒核酸的定性或定量分析。

灵敏度与特异性：

高灵敏度：最低检测限通常可达 10³ copies/mL 甚至更低（部分产品可达10¹ copies/μL），能有效检出低病毒载量的样本。

高特异性：探针与靶序列特异性结合，极少与其他虾类病毒（如WSSV、TSV等）发生交叉反应。

适用仪器：适用于主流的实时荧光定量PCR仪，如ABI 7500、LightCycler系列等。

�� 产品组成与规格

组分名称  规格示例  说明

PCR反应液  20 μL × 48管 或 50T  预混了dNTPs、缓冲液、引物和探针（TaqMan Probe）。

酶混合物 (Enzyme)  50 μL - 100 μL  含Taq DNA聚合酶和UNG酶（防污染酶），需-20℃保存。

阳性对照 (Positive Control)  50 μL  含BP目标基因片段的质粒或灭活病毒DNA，用于验证试剂有效性。

阴性对照 (Negative Control)  1 mL  无菌双蒸水或缓冲液，用于监控实验过程是否被污染。

�� 操作流程简述

样本采集与处理：

组织样本：取对虾的肝胰腺、鳃、淋巴器官或血淋巴。幼虾可取完整个体。

样本保存：若不能立即提取核酸，样本应保存在95%乙醇或-20℃冰箱中。

核酸提取：

使用商用DNA提取试剂盒（如柱提法或磁珠法）或试剂盒推荐的简易裂解法提取样本中的基因组DNA。

注意：DNA纯度直接影响扩增效率，需避免蛋白或抑制物残留。

试剂准备与加样：

将反应液和酶液在冰上解冻并充分混匀，离心30秒。

按说明书比例配制反应体系（通常为20-25 μL），向反应管中加入提取的DNA模板（通常5-10 μL）。

必须设置：阴性对照（无菌水）和阳性对照（试剂盒提供）。

上机扩增：

将反应管放入荧光定量PCR仪。

推荐程序（具体以说明书为准）：

预变性：95℃ 5分钟；

循环反应：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（在此步收集荧光），进行40-45个循环。

结果判读：

阳性（+）：Ct值 < 38，且扩增曲线呈现明显的指数增长期。

可疑（±）：Ct值在 38-40 之间，建议重新采样复测或结合临床症状判断。

阴性（-）：无Ct值或Ct值 ≥ 40，且无扩增曲线。

质控要求：阳性对照Ct值应≤35，阴性对照应无扩增曲线，否则实验视为无效。

⚠️ 注意事项与安全提示

严格分区操作：为防止气溶胶污染导致假阳性，实验必须严格分区（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），且各区物品专用。

试剂保存：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存。酶混合物对温度敏感，应避免反复冻融（建议分装保存）。

防污染处理：反应体系中若含有dUTP和UNG酶，可在反应前进行50℃保温，以降解可能存在的污染性扩增产物。

废弃物处理：反应结束后，严禁开盖，以免扩增产物（含荧光染料和DNA）污染环境。应将反应管密封后作为生物废弃物处理。

公司正在出售的产品：

PCR（聚合酶链式反应）是一种基因扩增技术，

用于检测或定量特定DNA/RNA序列。其核心是通过温度循环（变性、退火、延伸）扩增目标基因片段，而非培养生物体。

关键点：

无需培养：PCR直接检测样本中的核酸，无需预先培养微生物或细胞。

应用场景：病原体检测（如病毒、细菌）、基因表达分析、遗传病诊断等。