恶臭假单胞菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法） 新品

 产品介绍：

菌种背景与检测意义

菌种简介：恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）属于假单胞菌属，是一种革兰氏阴性杆菌。它是一种环境适应性极强的非发酵菌。

 危害特征：

食品腐败：是导致冷藏食品（尤其是牛奶、肉类）腐败变质的主要菌种之一，能产生蛋白酶和脂肪酶，分解蛋白质和脂肪。

条件致病：虽然通常被认为是非致病性的，但在免疫力低下的个体中，偶尔会引起机会性感染。

检测意义：传统的培养法检测周期长，且难以与荧光假单胞菌等区分。该试剂盒通过检测特异基因片段，可快速、准确地鉴定样本中是否含有恶臭假单胞菌，为产品质量控制提供依据。

�� 检测原理与核心优势

该试剂盒采用的是恒温荧光检测技术（Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP）。

核心原理：针对恶臭假单胞菌基因组中高度保守的特异核酸序列（如16S rRNA基因或特异性功能基因片段）设计特异性引物。在恒温条件下（通常为63℃），利用链置换DNA聚合酶对目标片段进行指数级扩增。随着DNA的合成，反应体系中的荧光染料（如SYTO-9）嵌合到双链DNA中发出荧光，仪器实时监测荧光信号的变化，从而实现对细菌核酸的定性检测。

自动判读：仪器会根据荧光曲线的拐点（Tt值）自动判读结果，部分试剂盒也可通过肉眼观察颜色变化（如从橙色变绿色）进行判读。

主要优势：

操作快速：整个检测过程通常仅需45-60分钟，无需复杂的热循环。

高灵敏度：检出限可达1×10² - 1×10³ CFU/mL，能够检测出极低含量的病原菌。

高特异性：引物针对恶臭假单胞菌特有序列设计，与其他常见细菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、荧光假单胞菌等）无交叉反应。

抗干扰性强：可直接检测经过简单处理的样本，对复杂基质的耐受性较好。

�� 产品性能指标

指标项目  性能参数参考

检测范围  1×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)

最低检测限  1×10² - 1×10³ CFU/mL

反应时间  45-60 min

反应温度  63℃

适用仪器  Genie系列、DHelix-C/Q、ESE Tube Scanner、实时荧光恒温检测仪

适用样本  食品（乳制品、肉类）、药品、化妆品、水样、环境拭子等

�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分（以48T或50T规格为例）：

LAMP预混液：含有dNTPs、缓冲液、Mg²⁺、甜菜碱等。

酶液：含有Bst DNA聚合酶。

引物混合液：针对恶臭假单胞菌特异序列设计的LAMP引物。

阳性对照：含有恶臭假单胞菌目标基因片段的质粒或标准DNA。

阴性对照：灭菌纯水。

储存条件：所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存，有效期通常为 12个月。运输过程需使用干冰或冰袋，避免反复冻融。

�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取

采集待检测的食品、水体或拭子样本。

使用CTAB法或商品化的基因组DNA提取试剂盒，提取样本的基因组DNA作为模板。

试剂准备

将试剂从-20℃取出，室温平衡10分钟，完全解冻。

涡旋混匀各组分，并瞬时离心。

反应体系配置

在冰上操作，按说明书比例配制反应体系（通常为25 μL）。

将配制好的反应液分装至PCR管中。

上机扩增与检测

将配置好的反应管放入恒温荧光检测仪中。

设置反应温度为63℃，反应时间为45-60 min。

仪器实时监测荧光信号变化，并自动判读结果。

结果判读

阳性：荧光曲线呈典型的“S”型增长，且Tt值（Threshold Time）≤ 45 min。

阴性：荧光曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，或Tt值无定义。

⚠️ 注意事项

防止污染：实验应严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免气溶胶污染。

操作规范：试剂配制和加样步骤建议在冰上进行，避免酶活性损失。反应液对光敏感，应避光保存和使用。

质控要求：每次实验必须设置阴性对照（无模板）和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增，则本次实验结果无效。

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注意事项

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。