Recombinant Human Legumain 新品

重组蛋白生产流程：

通常包括以下几个核心步骤：

基因克隆：首先，科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列（目的基因）。

构建载体：将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中，这个载体就像是一个运输工具，

能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。

转入宿主：将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中，这个过程称为“转化”或“转染”。

表达与培养：宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养，其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息，开始大量生产目标蛋白。

纯化：通过一系列复杂的生物化学方法（如层析技术），将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来，以获得高纯度的产品。

产品概述：

Legumain是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶（属于C13家族），具有严格的天冬酰胺特异性水解活性，在酸性环境（如溶酶体pH 3-5）下活性最强。它在多种生理和病理过程中扮演关键角色，包括抗原呈递（MHC II类分子加工）、细胞外基质降解、肿瘤侵袭与转移、动脉粥样硬化及神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）。值得注意的是，Legumain在多种实体瘤（如乳腺癌、胰腺癌）的肿瘤微环境、肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）及新生血管内皮细胞中高表达，是近年来备受关注的肿瘤标志物和治疗靶点。

别名

AEP, Asparaginyl endopeptidase, cysteine 1, Cysteine protease 1, EC 3.4.22.34, Legumain, LGMN, LGMN_HUMAN, LGMN1, Protease, Protease cysteine 1, Protease cysteine 1 (legumain), PRSC1

宿主; E.Coli

表达区间; 18-433

分子量; 45.7 kDa

标签; N-terminal His Tag

纯度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE

应用; Western Blot, ELISA

性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.

 操作要点：

电泳条件‌：使用15% SDS-PAGE凝胶，以提高对小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。

‌转膜参数‌：采用湿转法，100 V、60–90分钟（4°C），使用PVDF膜（需甲醇预活化）。

‌抗体选择‌：

一抗：抗CST3多克隆抗体（如兔源抗体），推荐稀释比为1:1000。

二抗：HRP标记的山羊抗兔IgG，稀释比1:10,000。

‌显色方式‌：ECL化学发光法，预期条带位于‌~13.4 kDa‌处。

‌内参建议‌：由于CST3分子量较小，可选用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作为内参，避免条带重叠。

注意事项：

‌安全提示‌: 操作时需佩戴手套和护目镜，遵循实验室生物安全规范。

 安全提示：仅限研究使用，避免接触临床样本；操作时需佩戴防护装备。

质量控制：产品纯度通过SDS-PAGE验证，确保生物活性稳定；避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。

兼容性：适用于多种实验体系，但需优化浓度以避免非特异性结合。

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