兔海绵体内皮细胞 新品

细胞简介：

兔海绵体内皮细胞分离自海绵体组织；阴茎海绵体是由海绵状的小梁和腔隙构成的血窦结构，它主要包括海绵体内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中，而海绵体内皮细胞则覆盖于海绵体血窦的腔面，仅占海绵体组织的2.8%。在消化海绵体组织时，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接。如果消化时间延长或胶原酶浓度过大，平滑肌细胞和成纤维细胞也将被消化下来，从而影响海绵体内皮细胞的纯度。因此，比较筛选合适的胶原酶浓度和消化时间是成功分离海绵体内皮细胞的关键。

产品信息：

方法简介：实验室分离的兔海绵体内皮细胞采用混合酶消化法结合机械分离法、并用内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的兔海绵体内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品名称：兔海绵体内皮细胞

组织来源：海绵体组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养信息：包被条件PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%胰蛋白酶兔海绵体内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞培养指南：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

复苏的原则

快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
通用注意事项：

无菌操作：所有操作全程在超净台内进行，定期对超净台、培养箱进行消毒，使用无菌的培养基、血清、试剂

细胞状态监测：每天观察细胞形态、密度、颜色变化，记录生长情况，若发现细胞出现污染、形态异常、生长缓慢等问题，及时处理

培养基更换：原代细胞培养初期每2-3天更换一次培养基，传代后每1-2天更换一次，根据培养基颜色变化（变黄表示营养耗尽）灵活调整

避免过度操作：原代细胞较为脆弱，避免频繁吹打、离心，尽量减少对细胞的机械损伤

冻存备份：原代细胞分离成功后，及时冻存部分细胞作为备份，冻存液使用90%血清+10%DMSO，采用梯度降温法冻存

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