兔支气管平滑肌细胞
产品信息:
产品名称 兔支气管平滑肌细胞
组织来源 支气管组织
种属 兔
产品规格 5×10^5Cells/T25
英文名称 | Rabbit Bronchial Smooth Muscle Cells | 规格 | 5×105 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 | 货号 | P-X2014 |
培养信息:
方法简介:实验室分离的兔支气管平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:实验室分离的兔支气管平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称:兔支气管平滑肌细胞
英文简称:TSMCs
组织来源:支气管组织
产品规格:5×10⁵Cells/T25培养瓶
培养信息:包被条件
培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液:0.25%胰蛋白酶兔支气管平滑肌细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介 :
兔支气管平滑肌细胞分离自支气管组织;支气管(Bronchi),是指由支气管分出的各级分枝,由支气管分出的一级支气管,即左、右主支气管。左主支气管与右主支气管相比较,前者较细长,走向倾斜;后者较粗短,走向较前者略直,所以经支气管堕入的异物多进入右主支气管。支气管和支气管还有以区别就是,支气管是以“C”型的支气管软骨为支架,而支气管不是。支气管平滑肌细胞主要功能:①支气管平滑肌细胞能维持支气管张力,保持支气管形态;②支气管平滑肌特异的超微结构特点和调节机制是支气管正常生理功能的基础;③支气管平滑肌通过分泌细胞因子和趋化因子等促炎介质,发挥免疫调节功能。支气管平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态:大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
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原代细胞纯化与鉴定:
纯化方法:
差速贴壁法:利用不同细胞贴壁速度差异,如成纤维细胞贴壁快,上皮细胞贴壁慢,在接种后1-2小时移除未贴壁细胞,可初步分离不同细胞类型。
免疫磁珠分选法/流式细胞术:针对特定细胞表面标志物,利用特异性抗体标记细胞,通过磁珠或流式分选仪分离目标细胞,纯度可达90%以上。
鉴定手段:通过形态学观察(原代细胞形态多样,与传代细胞有差异)、免疫细胞化学染色、RT-PCR检测特异性基因表达等方法,确认目标细胞的纯度和身份。