班氏丝虫染料法荧光定量PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒用于体外定性检测人全血样本中的班氏丝虫（Wuchereria bancrofti）特异性DNA，适用于临床辅助诊断及流行病学调查。

检验原理

采用TaqMan探针法荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，探针磷酸化以阻止延伸。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。

定量分析：通过实时监测荧光强度（激发波长471 nm，发射波长530 nm），结合标准曲线计算靶DNA浓度。

主要组成成分

qPCR反应液（2×）：1.1 mL ×1管

引物探针混合液：100 μL ×1管

阳性对照：200 μL ×1管（含班氏丝虫特异性DNA）

阴性对照：200 μL ×1管（无靶标DNA）

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA，建议使用血液DNA提取试剂盒。

反应体系配制：按比例混合qPCR反应液、引物探针混合液及模板DNA。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 2分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（信号采集）

数据分析：

定性检测：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性，≥40为阴性，35-40需复测。

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样本浓度。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免交叉污染。

试剂解冻后需充分混匀，分装使用以减少冻融次数。

若扩增曲线异常或对照结果不符，需重新检测。

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