斑节对虾杆状病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，无需额外优化引物或探针。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对斑节对虾杆状病毒高度保守区设计，避免与其他病毒交叉反应。

内置对照：提供阳性对照（DNA片段），便于区分假阴性结果。

适用范围：适用于科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

荧光PCR反应液：预混含染料法荧光PCR所需缓冲体系。

酶混合液：包含逆转录酶及热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：10^8拷贝/μL的DNA片段（需按说明书稀释使用）。

阴性对照：无核酸酶水。

专用模板稀释液：用于阳性对照梯度稀释。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler

Eppendorf Mastercycler ep realplex

操作步骤

1. 样品处理

核酸提取：推荐使用磁珠法或离心柱法提取样本RNA，避免基因组DNA污染。

样本类型：适用于对虾组织、血液或环境样本（需确保RNA完整性）。

2. 试剂配制（以50T为例）

每20μL反应体系：

反应液 18μL

酶液 2μL

模板RNA 5μL（阴性/阳性对照同体积加入）

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 60 sec | |

| 荧光信号采集 | 60℃ | 实时 | |

4. 数据分析

阈值设定：以扩增曲线指数期起始点为基准。

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型。

注意事项

实验分区操作：核酸提取、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

阳性对照稀释需在独立区域完成，严禁直接使用高浓度标准品。

试剂解冻后需彻底混匀并短暂离心，避免组分浓度不均。

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