鲍球状病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

产品特点

高特异性：针对鲍疱疹样病毒保守序列设计引物，无交叉反应。

高灵敏度：检测限低至数百拷贝/反应。

便捷性：即开即用，用户仅需提供DNA模板。

防污染设计：一管式闭管检测，避免扩增产物污染。

兼容性：支持常见荧光定量PCR仪（需根据机型添加10×ROX参比染料）。

试剂盒组成

PCR反应液：预混含染料、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液等。

阳性对照：1×10⁸拷贝/μL的AbHV DNA片段（非活病毒）。

荧光PCR专用模板稀释液：用于标准曲线制备。

说明书（以实际包装内为准）。

操作步骤

样本DNA提取

建议使用兼容的核酸提取试剂盒，提取后DNA应避免反复冻融。

标准曲线制备（独立区域操作）

标记6管（7-2号），每管加45 μL稀释液。

梯度稀释阳性对照：

7号管：5 μL原液（10⁸拷贝/μL）→ 震荡混匀→ 10⁷拷贝/μL。

依次稀释至2号管（10³拷贝/μL），每次更换枪头。

PCR反应体系配制

每20 μL反应体系建议：

10 μL预混PCR反应液

2 μL DNA模板（样本/标准品）

0.5 μL引物探针混合液（若未预混）

补足无核酸酶水至20 μL。

扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 |

（注：具体参数需根据引物特性优化）

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免污染。

阳性对照：严禁直接使用高浓度原液，需严格按梯度稀释。

质量控制：建议每批次实验包含阴性对照（无模板水对照）。

仪器校准：使用前确认荧光通道与染料匹配（如FAM/SYBR Green）。

结果判读

阈值设定：以扩增曲线指数期起始点为基准。

定量分析：根据标准曲线（Ct值-log拷贝数）计算样本病毒载量。

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