丙型肝炎病毒6型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green染料法，通过实时荧光定量RT-PCR技术，定性及定量检测人血清或血浆样本中丙型肝炎病毒6型（HCV GT6）的RNA，适用于：

HCV感染者的基因分型确认

抗病毒治疗疗效监测

流行病学研究

注：不用于血源筛查或无症状人群初筛。

检测原理

RNA提取：样本中病毒RNA通过磁珠法/柱提法分离。

RT-PCR扩增：

反转录（RT）：HCV RNA → cDNA

荧光定量PCR：采用HCV GT6特异性引物扩增病毒保守区（如5'UTR+核心区），SYBR Green染料嵌入双链DNA发出荧光信号。

熔解曲线分析：通过产物Tm值（如82±0.5℃）确认扩增特异性，排除非特异性产物。

主要组成成分

| 组分 | 规格（96测试） | 保存条件 |

| GT6 PCR反应液 | 1.2 mL | -20℃避光 |

| RT-PCR酶混合液 | 200 μL | -20℃ |

| HCV GT6阳性对照 | 1.0 mL (1×10⁵ IU/mL) | -70℃ |

| 阴性对照 | 1.0 mL | -20℃ |

| RNase-Free水 | 1.5 mL | 室温 |

技术参数

检测下限：≤15 IU/mL

线性范围：10²~10⁸ IU/mL（R²≥0.99）

特异性：

不与其他HCV基因型（1a/1b/2/3/4/5）交叉反应

无HBV、HIV、EBV等常见病原体干扰

重复性：CV值≤5%（高浓度样本）

操作流程

1. 样本前处理

样本类型：EDTA/肝素抗凝血浆或血清

RNA提取：推荐配套HCV RNA提取试剂盒（如磁珠法），洗脱体积≤60 μL。

2. PCR反应体系配制（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| GT6 PCR反应液 | 10 μL |

| RT-PCR酶混合液 | 2 μL |

| RNA模板 | 5 μL |

| RNase-Free水 | 3 μL |

3. 扩增程序（ABI 7500为例）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 反转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

| 熔解曲线 | 60℃→95℃ | 0.3℃/sec | 1 | 是 |

结果判读

定量分析：

Ct值≤38且熔解峰为单峰（Tm=82±0.5℃）：判为阳性，通过标准曲线计算病毒载量（IU/mL）。

阴性判定：

Ct值≥40或无扩增曲线：样本HCV GT6 RNA阴性。

灰区处理：

38<Ct值<40：建议重复检测，若重复Ct值仍<40则判为阳性。

注意事项

实验需在PCR洁净区（符合ISO 14644-1标准）进行，防止气溶胶污染。

熔解曲线出现多峰提示非特异性扩增，结果无效。

阳性对照Ct值需在28±3范围内，否则实验无效。

试剂反复冻融≤3次，避免荧光淬灭。

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