病毒性出血性败血症病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于病毒性出血性败血症病毒（VHSV）的快速、高灵敏度检测。适用于科研实验中的定性和定量分析，具备高特异性和宽线性范围（覆盖至少5个数量级），可检测样品中VHSV的RNA拷贝数。

组分与储存

核心组分：

预混RT-PCR反应液（含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及优化引物/探针）

阳性对照（无传染性RNA片段，浓度1×10^8拷贝/μL）

荧光PCR专用模板稀释液

阴性对照（DEPC水）

规格：50次/盒（20μL反应体系）

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；避免反复冻融。

操作步骤

1. 样品准备

RNA提取：使用病毒RNA提取试剂盒从待测样品中提取RNA，建议使用无RNA酶耗材。

标准曲线制备（定量检测需选做）：

标记6管，分别加入45μL稀释液。

取5μL阳性对照加入第1管，梯度稀释至10^2~10^7拷贝/μL（示例：10倍稀释法）。

2. PCR反应体系配制

单反应体系（20μL）：

预混反应液 10μL

模板RNA 2μL（或标准品/对照）

DEPC水补至20μL

程序设置：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

3. 结果分析

定性检测：通过扩增曲线和Ct值判定阳性（Ct≤35）或阴性（无扩增）。

定量检测：根据标准曲线计算样品RNA拷贝数。

注意事项

分区操作：试剂配制、样品处理需在独立区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

安全提示：本试剂盒不含活病毒，但需按生物安全二级（BSL-2）标准处理潜在感染性样品。

适用性：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

性能参数

灵敏度：最低检测限10^2拷贝/μL。

特异性：引物针对VHSV保守区设计，不与相近病毒发生交叉反应。

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