病毒性神经坏死病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒用于定性或定量检测鱼类（如石斑鱼、鲈鱼等）组织、水体或卵中 病毒性神经坏死病病毒（VNNV） 的RNA，适用于疫病监测、养殖场防控及科研用途。

检测原理

RNA提取：样本中提取病毒RNA。

反转录（RT）：将RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR：采用 SYBR Green染料法，通过特异性引物扩增VNNV靶基因（如RNA依赖性RNA聚合酶基因），实时监测荧光信号，定量病毒载量。

主要组分

| 组分名称 | 规格 | 数量 |

| RT-PCR预混液（含SYBR Green） | 1 mL/管 | 1管 |

| VNNV特异性引物混合液 | 100 μM | 1管 |

| 阳性对照（VNNV RNA） | 1×10^5 copies/μL | 1管 |

| 阴性对照（DEPC水） | 1 mL | 1管 |

| RNase-Free水 | 1 mL | 1管 |

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

预混液解冻后需冰上操作，建议分装使用。

操作步骤

1. 样本前处理

取鱼类脑、眼或卵巢组织（50-100 mg），匀浆后使用RNA提取试剂盒（需另购）提取总RNA。

2. 反转录（RT）

按说明书将RNA模板、引物和RT酶混合，42℃反应15分钟。

3. 荧光定量PCR

反应体系（20 μL）：

预混液：10 μL

引物混合液：2 μL

cDNA模板：2 μL

RNase-Free水：6 μL

反应程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec | 40 |

| 熔解曲线分析 | 60℃→95℃（每0.5℃升1 sec） | 1 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线为单一峰值（Tm值符合说明书范围）。

阴性：无Ct值或Ct值>40。

临界值：35<Ct≤40，建议重复检测。

注意事项

实验需在 生物安全二级实验室 进行，避免气溶胶污染。

试剂开封后尽快使用，避免反复冻融。

不同仪器需优化反应条件，建议设置 三复孔。

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