禽肺病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

禽肺病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品用途

适用于检测禽类呼吸道分泌物、组织样本（如肺、气管等）中的禽肺病毒核酸，用于临床病原学辅助诊断及流行病学监测。

检验原理

核酸提取：通过离心柱法或裂解液提取样本RNA。

反转录（RT）：利用反转录酶将RNA模板转化为cDNA。

荧光定量PCR：

采用染料法（如SYBR Green）实时监测扩增过程，特异性引物靶向禽肺病毒保守序列。

荧光信号与扩增产物量成正比，通过标准曲线实现定量分析。

试剂组成（以50T/盒为例）

RT-PCR反应液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺等，500μL×2管。

酶混合液：反转录酶与Taq DNA聚合酶，50μL×1管。

阳性质控品：禽肺病毒RNA片段，50μL×1管。

阴性质控品：无核酸水，250μL×1管。

储存条件及有效期

储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

有效期：12个月。

操作流程

样本处理：采集呼吸道拭子或组织匀浆，按规范提取RNA。

RT反应：42℃孵育30分钟合成cDNA。

PCR扩增：

预变性：95℃ 3分钟。

循环参数：95℃ 15秒→60℃ 30秒（40循环），60℃采集荧光信号。

结果分析：根据Ct值及标准曲线判定病毒载量。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒RNA。

特异性：不与禽腺病毒、禽流感病毒等交叉反应。

线性范围：10²~10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

不同批号组分禁止混用。

实验需在生物安全二级（BSL-2）环境下操作。

阴/阳性质控品需与样本同步检测。

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