消化链球菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

消化链球菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对消化链球菌属（Peptostreptococcus）的保守基因序列设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增，实现定性或定量分析，灵敏度高（检测下限可达10^2拷贝/μL），特异性强（避免与其他细菌DNA交叉反应）。

试剂盒组分

预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料（即开即用）。

阳性对照：消化链球菌靶基因片段（非活菌，浓度1×10^8拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

操作步骤

1. 样本处理

临床样本（粪便、病灶分泌物）：需提取DNA（推荐使用柱式提取试剂盒）。

食品/环境样本：按标准预处理后提取DNA。

2. 反应体系配置（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 无核酸酶水 | 6 |

3. PCR程序设置（以ABI 7500为例）

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增

质量控制

阴性对照（NTC）：应无扩增曲线。

阳性对照：Ct值需在预期范围内（如Ct<30）。

技术重复：建议3复孔，CV值≤5%。

注意事项

避免反复冻融试剂，解冻后需涡旋混匀并短暂离心。

操作分区进行（样本处理、PCR配置、扩增区），防止污染。

熔解曲线应呈现单一峰，杂峰提示非特异性扩增。

结果判读

定性：Ct值≤35且熔解曲线符合为阳性。

定量：通过标准曲线计算拷贝数（需用户自备梯度稀释标准品）。

储存与有效期

-20℃避光保存，有效期12个月。

公司正在出售的产品