厌氧消化链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

厌氧消化链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对厌氧消化链球菌（Anaerotruncus colihominis）基因组高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量检测。反应体系中若存在目标核酸模板，PCR扩增将释放荧光信号，仪器通过相应通道采集数据并分析结果。

产品特点

高灵敏度：优化引物设计，检测限低至10拷贝/μL。

特异性强：引物经严格验证，避免与其他微生物DNA交叉反应。

即开即用：预混反应液含所有必要组分（除模板DNA），减少操作步骤。

双重质控：提供阳性对照（非活体DNA片段）和阴性对照（无模板对照，NTC），确保结果可靠性。

宽动态范围：定量检测线性范围覆盖5个数量级（10^2–10^7拷贝/μL）。

操作步骤

样本准备

DNA提取：

临床样本（如粪便、病灶分泌物）需按标准方法提取DNA，推荐使用柱式提取试剂盒。

提取后DNA建议稀释至Ct值20–30范围内（可用无菌超纯水或1×稀释缓冲液调整）。

阳性对照稀释（若需定量）：

按10倍梯度稀释阳性对照（10^2–10^7拷贝/μL），独立操作以避免污染。

PCR反应体系配置

试剂解冻与混匀：

从-20℃取出预混液，冰上解冻后轻柔颠倒混匀，避免气泡。

短暂离心（1000 rpm，5–10秒）收集管壁液体。

反应体系（20μL/孔）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×预混液（含染料） | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| RNase-free H₂O | 6 |

加样建议：

每样本设置3次技术重复，并包含NTC（以水替代模板）及阳性对照。

上机检测

程序设置（以常见机型为例）：

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60–95℃，每0.5℃递增

数据分析：

定性检测：Ct值≤35且熔解曲线单一峰判为阳性。

定量检测：根据标准曲线计算模板拷贝数。

注意事项

实验分区操作（样本处理、PCR配置、扩增区分离），避免气溶胶污染。

试剂解冻后宜立即使用，避免反复冻融（≤3次）。

若熔解曲线出现非特异峰，需优化退火温度或重新设计引物。

储存与有效期

储存条件：-20℃避光保存

有效期：12个月

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