饰纹汀蛙虹彩病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

饰纹汀蛙虹彩病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专用于饰纹汀蛙虹彩病毒（Boheliridovirus, BIV）的荧光定量PCR检测，采用染料法（如SYBR Green I）或探针法（如FAM-BHQ1标记）实现高特异性、高灵敏度的病毒核酸定量分析。适用于科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

PCR反应预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（或预装探针）。

阳性对照：10^8拷贝/μL的BIV DNA片段（非活体样本，避免生物污染风险）。

阴性对照：无核酸酶水。

模板稀释液：用于标准品梯度稀释。

使用说明书（当前文件）。

操作步骤

标准品稀释（以10^2–10^7拷贝/μL梯度为例）

注意事项：

稀释操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，所有离心管需预先标记（如7–2号对应10^7–10^2拷贝/μL）。

稀释流程：

在7号管中加入45 μL稀释液，再加入5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL），涡旋混匀，得到10^7拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管（10^2拷贝/μL），每步更换枪头并充分混匀。

PCR反应体系配制

按以下比例配制20 μL反应体系（以探针法为例）：

预混液10 μL

引物混合液2 μL（上游引物：5’-AATGCTGACGAAATCATCAGTT-3’；下游引物：5’-TCCTTTTCCTCGTTGGAACAA-3’）

探针1 μL（FAM-BHQ1标记，序列：5’-TACGAATCGTTTCCCGTGAGACCCTTTAACG-3’）

模板DNA 2 μL

无核酸酶水补至20 μL

短暂离心后上机。

扩增程序设置

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：

95℃ 15秒

60℃ 30秒（荧光采集）

溶解曲线分析（染料法需增加此步骤）。

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本中病毒拷贝数。

特异性验证：溶解曲线单峰或探针信号Ct值≤35为阳性。

质控要求：

阴性对照无扩增（Ct值≥40或无信号）。

阳性对照Ct值在预期范围内。

注意事项

试剂保存于-20℃，避免反复冻融。

实验废弃物需按生物安全规范处理。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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