博兹曼荧光杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒用于体外定性检测临床样本中的博兹曼荧光杆菌(Chromobacterium violaceum)核酸。适用于临床疑似感染病例的辅助诊断、环境监测及科研用途。

检验原理

本试剂盒采用TaqMan探针法荧光定量PCR技术，针对博兹曼荧光杆菌特异性基因序列设计引物和探针。PCR扩增过程中，Taq DNA聚合酶水解与模板结合的探针，使荧光报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。通过实时监测荧光信号变化，实现对起始模板的定量分析。

主要组成成分

2×qPCR Master Mix (含dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等)

博兹曼荧光杆菌特异性引物探针混合液

阳性对照(重组质粒，1×10⁵ copies/μL)

阴性对照(无核酸水)

RNase-free水

储存条件及有效期

保存于-20℃避光保存

有效期12个月

反复冻融不超过5次

适用仪器

ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 480等主流荧光定量PCR仪。

样本要求

样本类型：血液、组织、脓液、环境样本等

样本采集：使用无菌容器采集

运输保存：2-8℃保存不超过72小时，长期保存应置于-70℃

检验方法

1 样本处理

按照核酸提取试剂盒说明书提取样本DNA。

2 PCR反应体系配制(20μL体系)

| 组分 | 体积(μL) |

| 2×qPCR Master Mix | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| 模板DNA | 5 |

| RNase-free水 | 补至20 |

3 PCR反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 采集荧光 |

| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 | 否 |

| 变性 | 95℃ | 15s | 40 | 否 |

| 退火延伸 | 60℃ | 45s | 40 | 是 |

质量控制

阴性对照：Ct值应≥38或无Ct值

阳性对照：Ct值应在18-22之间

内参基因：建议同时检测内参基因(如人类β-actin)

结果判读

阳性：Ct值≤35且有典型扩增曲线

可疑：35<Ct值<38，建议重复检测

阴性：Ct值≥38或无Ct值

检验方法的局限性

检测结果应结合临床症状和其他检查结果综合判断

样本中PCR抑制物可能导致假阴性

核酸提取质量影响检测灵敏度

产品性能指标

灵敏度：≤50 copies/reaction

特异性：不与常见细菌发生交叉反应

重复性：CV≤5%

注意事项

本试剂盒仅用于体外诊断

实验过程应分区操作，避免污染

废弃物应按照生物安全要求处理

不同批号试剂组分不可混用

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