小蛇菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green I荧光染料法，针对小蛇菌属高度保守基因区域设计特异性引物，通过实时荧光定量PCR技术对目标核酸进行扩增检测。反应过程中释放的荧光信号由仪器实时监测，实现定性或定量分析。

试剂组成

小蛇菌属通用预混反应液（含SYBR Green I、dNTPs、Taq酶等）

小蛇菌属特异性引物混合液

阳性质控品（无传染性DNA片段，1×10^8拷贝/μL）

阴性质控品（无核酸酶水）

说明书

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议分装），有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 480等）。

自备耗材与设备

无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL EP管）

滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）

离心机、涡旋振荡器、移液器

样品要求

样本类型：环境样本（如土壤、水体）、临床分离培养物等。

采集与保存：避免交叉污染，短期保存于-20℃，长期保存需-70℃以下（避免反复冻融）。

运输：2~8℃冰袋运输，严禁高温暴露。

使用方法

样本处理（需在洁净区操作）：

按标准方法提取DNA，建议使用柱式核酸提取试剂盒。

阳性对照无需处理，阴性质控品直接使用。

PCR反应体系配制（冰上操作）：

每20μL反应体系含：预混反应液10μL、引物混合液2μL、模板DNA 2μL、无核酸酶水补足至20μL。

扩增程序（以ABI 7500为例）：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）；

熔解曲线分析：60~95℃（每0.5℃递增，持续5秒）。

结果判读：

定量分析：通过标准曲线（10^2~10^7拷贝/μL梯度稀释）计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线峰值单一；

可疑：35<Ct<40，需重复检测；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断或食品检测。

实验需分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

不同批号组分不可混用，反应液解冻后需彻底混匀。

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