伪牛痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次反应（20μL/反应）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；低温运输（干冰或冰袋）。

适用样本：病毒RNA（需配合逆转录步骤）或DNA提取物。

应用范围：科研用途，不可用于临床诊断。

产品特点

高灵敏度：优化引物设计，检测限低至10拷贝/μL。

特异性强：针对伪牛痘病毒保守序列设计，避免与其他病原体交叉反应。

操作简便：预混反应体系（含染料、酶、缓冲液），只需加入模板即可运行。

兼容性广：适配常见荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad、Roche等）。

质量控制：提供阳性对照（无传染性DNA标准品），便于结果判读。

试剂盒组分

| 成分 | 规格（50次） | 保存条件 |

| qPCR预混液（含染料） | 1 mL | -20℃ |

| DNA聚合酶混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 伪牛痘病毒引物混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |

| 无核酸酶水 | 1 mL | 室温 |

实验流程

1. 样本制备

使用核酸提取试剂盒获取病毒RNA/DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

2. 标准曲线制备（定量检测需选做）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），每个梯度重复3孔。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| qPCR预混液 | 10 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| 模板DNA/RNA | 2 μL |

| 无核酸酶水 | 6 μL |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃/3 min | 1 |

| 变性 | 95℃/15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃/30 sec | 40 |

| 荧光采集 | 60℃ | 每循环 |

结果分析

阈值设定：以3–15循环的荧光信号基线标准差10倍为阈值。

Ct值判读：Ct≤35且扩增曲线呈S型判为阳性；Ct>35或无扩增曲线为阴性。

注意事项

实验分区操作（样本制备区、PCR反应区），避免污染。

阳性对照需单独稀释，防止污染待测样本。

染料法可能产生非特异性信号，建议通过熔解曲线验证产物特异性。

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