大肠弯曲杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

大肠弯曲杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对大肠弯曲杆菌基因组高度保守区域设计特异性引物。在PCR扩增过程中，SYBR Green与双链DNA结合释放荧光信号，通过仪器实时监测荧光强度变化，实现核酸的定性与定量分析。

试剂组成

预混扩增液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及优化引物。

阳性对照：含大肠弯曲杆菌靶序列的质粒DNA（用于质控）。

阴性对照：无核酸酶水（排除污染干扰）。

（注：具体组分以实际包装清单为准。）

操作步骤

样本处理：需自备待测DNA模板（建议浓度≥100拷贝/μL）。

反应体系配制：按比例混合扩增液、模板及对照品，总体积20μL。

上机检测：

程序设置：预变性（95℃, 2min）→ 循环扩增（95℃ 15s, 60℃ 30s, 40次）→ 熔解曲线分析。

适用仪器：ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

结果判读

定性检测：

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线为单一峰；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑（35<Ct<40）：需重复检测确认。

定量检测：以阳性对照标准曲线计算样本拷贝数，线性范围≥5个数量级。

性能参数

灵敏度：最低检出限100拷贝/反应。

特异性：引物经优化，不与常见肠道菌群交叉反应。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

熔解曲线分析用于排除非特异性扩增。

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