大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒

大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒

产品简介:

一、核心检测信息

检测目标

特异性定量大鼠血清、血浆（EDTA抗凝）或胃组织匀浆中的 Ghrelin，一种由胃X/A样细胞分泌的28肽激素，通过激活生长激素促分泌素受体（GHSR）调控食欲、能量代谢及生长激素释放。

检测原理

竞争性ELISA（因Ghrelin分子量小）：

样本中的Ghrelin与生物素标记的Ghrelin竞争结合预包被抗体 → HRP-链霉亲和素催化TMB显色（OD值与Ghrelin浓度负相关）。

可选酰化/非酰化检测：通过预处理区分活性形式（Octanoyl-Ghrelin）与非活性形式。

二、技术参数与验证

关键指标  技术说明

检测范围  10-2000 pg/mL（覆盖空腹与餐后水平）

最低检测限  3 pg/mL（高灵敏度）

样本兼容性  血清（避免溶血）、胃底组织匀浆（含1% TFA提取）、脑脊液（需浓缩）

特异性验证  不与大鼠Obestatin、LEAP-2交叉

酰化检测模块  可选配抗Octanoyl-Ghrelin抗体

三、典型应用场景

代谢疾病研究

肥胖模型中Ghrelin分泌节律异常与瘦素抵抗的关联分析

神经内分泌调控

下丘脑ARC神经元中Ghrelin对NPY/AgRP通路的激活作用

应激反应

慢性应激大鼠血浆Ghrelin水平与摄食行为的变化

四、操作关键要点

样本处理

胃组织提取：需用含1%三氟乙酸（TFA）的酸性溶液抑制蛋白酶降解

血浆样本：采集后立即加入AEBSF（蛋白酶抑制剂），-80℃保存

实验优化

竞争法需严格控制孵育时间（4℃过夜）

每板设置空腹/饱食对照（验证检测动态范围）

五、注意事项

干扰因素

高浓度甘油三酯（＞300 mg/dL）需超速离心去除

数据解读

建议联合检测GHSR表达量及生长激素（GH）水平

保存规范

未开封试剂盒4℃保存（有效期12个月），标准品-80℃分装（冻融≤2次）

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

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试剂盒组分应按说明储存，使用前平衡至室温。

实验中需避免交叉污染，建议使用一次性吸头。

充分混匀对实验结果至关重要。

试剂盒仅供研究使用，不可用于临床诊断。