伪旋毛虫染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

伪旋毛虫染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，专用于伪旋毛虫（Trichinella pseudospiralis）的快速、高灵敏度检测。适用于科研领域中对血液、组织、粪便等样本的定性或定量分析，支持低至100拷贝/反应的目标DNA检测，线性范围覆盖5个数量级。

核心组成

2×qPCR MagicMix：含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系。

伪旋毛虫特异性引物混合液：针对高度保守基因区域设计，无交叉反应。

阳性对照：无传染性DNA片段（1×10^8拷贝/μL，染料法起始浓度）。

自备试剂：样品DNA模板、超纯水、ROX（仅ABI 7500/7700/7900仪器需配置）。

保存与运输

试剂盒：-20℃避光保存，有效期12个月。

样本：短期可4℃保存，长期需-20℃（冻融≤3次），运输需冰袋密封。

操作流程

1. 阳性对照稀释（防污染操作）

标记6管，每管加45μL专用稀释液。

首管加5μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀得1×10^7拷贝/μL溶液，依次10倍稀释至1×10^2拷贝/μL。

2. 反应体系配制（20μL/管）

| 组分 | 待测样品管 | 阳性对照管 | 阴性对照管 |

| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| ROX（或超纯水） | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 样品DNA/cDNA模板 | 6 μL | - | - |

| 稀释后阳性对照 | - | 6 μL | - |

| 超纯水 | - | - | 6 μL |

3. PCR扩增参数

预变性：95℃ 3分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）；

熔解曲线分析（染料法必需）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒。

注意事项

分装试剂避免反复冻融，阳性对照单独存放。

不同仪器需优化退火温度或循环数（如iCycler IQ、LightCycler480等无需ROX）。

熔解曲线单峰表明特异性扩增，多峰需排查污染或引物二聚体。

质量控制

阴性对照：无扩增曲线（Ct值≥40或无信号）。

阳性对照：Ct值≤30，否则需重复实验。

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