传染性肌肉坏死病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测传染性肌肉坏死病病毒（IMNV）的RNA。通过实时监测荧光信号，实现对样本的定量（绝对/相对）及定性分析，适用于组织、细胞、血液等样本的病原体检测，灵敏度不低于1000 copies/mL。

实验原理

基于荧光定量PCR技术，通过SYBR Green等染料与双链DNA结合释放荧光信号，实时监测扩增过程。扩增曲线指数期的荧光阈值（Ct值）与起始模板量呈反比，通过标准曲线计算目标RNA浓度。

试剂盒组成

预混反应体系（48T/盒，八联管分装）

阳性质控品（IMNV RNA标准品）

阴性质控品（无核酸酶水）

复溶剂（如适用）

样本要求

样本类型：组织、细胞或血液，避免直接提供DNA/RNA。

保存条件：液氮、干冰或Trizol液保存，避免反复冻融。

核酸提取：需使用配套或兼容的核酸提取试剂。

操作步骤

加样：取5μL提取核酸、阴阳性质控品分别加入反应管，短暂离心混匀。

扩增程序设置（以ABI 7500为例）：

50℃ 10min（逆转录）；95℃ 2min（预变性）

45循环：95℃ 15sec（变性），60℃ 30sec（退火/延伸，收集FAM通道信号）

仪器参数：

荧光通道：FAM（检测），无淬灭通道，禁用ROX参比荧光。

反应体系：25μL/管。

结果分析

阈值设定：Baseline Start值3-15，End值5-20，阈值线置于指数扩增期。

判读标准：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型；

阴性：无Ct值或曲线平直。

重复性：批内/批间Ct值变异系数（CV）<3%。

注意事项

分区操作：样本处理、核酸扩增需在独立区域进行，避免污染。

质控要求：每批次实验需包含阴阳性质控品。

保存条件：试剂盒常温避光保存，有效期12个月。

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