中华根瘤菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

中华根瘤菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

即开即用：包含除引物和DNA模板外的所有组分，操作便捷。

高特异性：引物针对中华根瘤菌（Sinorhizobium spp.）保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

高灵敏度：可检测低至单拷贝的DNA分子，线性范围达5个数量级。

兼容性强：适用于多数核酸纯化方法，提供阳性对照以区分假阴性结果。

双重功能：支持定性与定量分析，结果可通过荧光信号直接判读。

试剂盒组分

2×荧光定量PCR预混液（含染料、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液及热启动DNA聚合酶）

阳性对照（1×10⁸拷贝/μL中华根瘤菌DNA）

阴性对照（无核酸酶水）

使用说明书

操作步骤

标准曲线制备（定量分析适用）

取6支离心管，依次标记为7至2号，每管加入45μL模板稀释液。

在7号管中加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得到1×10⁷拷贝/μL的标准品。

依次梯度稀释至2号管，获得1×10⁶至1×10¹拷贝/μL的标准曲线样品。

样本DNA制备

使用常规方法提取待测样本DNA，建议设置阳性/阴性对照各1管。

纯化后的DNA应避免反复冻融，建议分装保存。

qPCR反应体系（20μL）

按以下比例配制反应液（以单次反应为例）：

2×预混液：10μL

引物（未提供）：各0.5μL（终浓度0.2μM）

DNA模板：2μL

无核酸酶水：补足至20μL

反应程序：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

数据分析

定性检测：通过Ct值判断样本是否含有目标DNA（阴性对照应无扩增）。

定量检测：根据标准曲线计算样本中目标DNA的拷贝数。

注意事项

实验前需校准荧光定量PCR仪，确保光学参数匹配所用染料。

避免试剂反复冻融，预混液使用前需充分混匀并短暂离心。

操作时需佩戴手套，防止核酸污染。

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