弗朗西斯菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

弗朗西斯菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

即开即用：预混优化试剂，用户仅需提供DNA模板。

高特异性：引物针对弗朗西斯菌保守序列设计，与其他病原体无交叉反应。

高灵敏度：检测下限可达100拷贝/反应。

防污染设计：一管式闭管检测，减少气溶胶污染风险。

兼容性：适配常见荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断

试剂盒组成

| 成分 | 编号 | 包装规格 | 保存条件 |

| 2×qPCR MasterMix | FC-MM | 500 μL（棕盖） | -20℃避光 |

| 荧光染料预混液 | FC-Dye | 1 mL（蓝盖） | 4℃避光 |

| 弗朗西斯菌引物混合液| FC-Primer| 100 μL（白盖） | -20℃ |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）| FC-PC | 50 μL（红盖） | -80℃ |

| 无核酸酶水 | FC-H₂O | 1 mL（透明） | 室温 |

实验步骤

1. 样本处理

提取待测样本DNA（推荐浓度≥10 ng/μL）。

阳性对照需稀释至1×10⁴~1×10⁶拷贝/μL作为标准曲线。

2. 反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| 2×qPCR MasterMix | 10 μL |

| 引物混合液 | 0.8 μL |

| 荧光染料 | 0.5 μL |

| 模板DNA | 2 μL |

| 无核酸酶水 | 6.7 μL |

3. PCR程序设置

预变性：95℃ 3 min

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5 sec

数据分析

阈值设定：取指数扩增期荧光信号显著上升点。

阳性判定：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰。

阴性对照：应无扩增曲线（Ct值≥40或无信号）。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免核酸污染。

试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。

阳性对照与样本需分区域操作，防止交叉污染。

长期保存请分装，避免反复冻融。

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