星状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

星状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量RT-PCR技术，专为星状病毒（Astrovirus）核酸的高灵敏度检测设计。通过优化的一步法反应体系，实现反转录（RT）与实时定量PCR（qPCR）在同一反应管内完成，减少操作步骤，降低污染风险。试剂盒适用于临床样本、环境样本或科研中病毒RNA的定性与定量分析。

产品组分

2× RT-qPCR预混液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺及稳定剂（250 μL/管）。

逆转录酶与热启动Taq酶混合液：高效合成cDNA并实现高特异性扩增（20 μL/管）。

无核酸酶水（250 μL/管）。

阳性对照（非传染性DNA片段，1×10⁸拷贝/μL）。

技术参数

灵敏度：可检测至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或1 pg（中表达靶标）。

线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10²–10⁷拷贝/μL）。

特异性：引物针对星状病毒保守区设计，无交叉反应。

稳定性：预混液在4℃下可保存24小时，性能不变。

操作步骤

1. 标准曲线制备

标记离心管（7–2号），每管加入45 μL专用稀释液。

取5 μL阳性对照加入7号管，震荡混匀（10⁷拷贝/μL），依次梯度稀释至10²拷贝/μL。

2. 反应体系配制（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×预混液 | 10 |

| 酶混合液 | 0.5 |

| 引物（上下游各10 μM） | 0.4 |

| 模板RNA | 2 |

| 无核酸酶水 | 至20 |

3. 程序设置

逆转录：50℃ 15分钟。

预变性：95℃ 5分钟。

PCR扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环），熔解曲线分析（65–95℃）。

注意事项

操作需在独立区域进行，避免气溶胶污染。

阳性对照仅用于体系验证，不可替代临床样本质控。

本产品限科研使用，临床诊断需经额外验证。

储存条件

-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

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