猪囊尾蚴染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I 荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术特异性检测猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）线粒体细胞色素C氧化酶亚基I（COX1）基因片段。适用于猪肉组织、血液、脑脊液等样本中猪囊尾蚴DNA的定性/定量分析，灵敏度高、特异性强，为囊尾蚴病诊断和流行病学监测提供可靠工具。

检测原理

DNA提取：样本中基因组DNA经裂解、纯化获得模板。

qPCR扩增：

特异性引物靶向猪囊尾蚴COX1基因保守区域。

SYBR Green I 染料嵌入双链DNA，在激发光下发射荧光信号。

荧光强度与PCR产物量成正比，通过循环阈值（Ct值）定量初始DNA浓度。

熔解曲线分析：验证扩增产物特异性（单一峰形）。

试剂盒组分

| 组分名称 | 48T用量 | 保存条件 |

| 2× SYBR Green qPCR Master Mix | 600 μL | -20℃ |

| 猪囊尾蚴引物混合液（干粉/液） | 48 μL | -20℃ |

| DNA提取试剂盒（裂解液+纯化柱） | 1套 | 室温 |

| 阳性对照（猪囊尾蚴DNA） | 50 μL | -20℃ |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL | -20℃ |

| RNase-Free Water | 1 mL | 室温 |

操作步骤

1. 样本DNA提取

参照配套DNA提取试剂盒说明书操作，最终用50 μL洗脱液溶解DNA。

2. qPCR反应体系配制

| 组分 | 单反应体积 |

| 2× SYBR Green Master Mix | 10 μL |

| 引物混合液 | 0.8 μL |

| DNA模板 | 2 μL |

| RNase-Free Water | 7.2 μL |

| 总体积 | 20 μL |

注意：每样本设3复孔，同时设置阳性/阴性对照。

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | - |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | - |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | YES |

| 熔解曲线 | 60℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 | 连续采集 |

结果判读

阴性对照：Ct值≥40或无扩增曲线。

阳性对照：Ct值≤35且熔解曲线为单峰。

样本判定：

阳性：Ct值≤38，熔解曲线峰与阳性对照一致。

可疑：Ct值38-40，建议重复检测。

阴性：无Ct值或Ct值>40。

定量分析：通过标准品曲线计算拷贝数（需另行构建质粒标准品）。

性能参数

灵敏度：最低检出限10 copies/μL

特异性：不与猪带绦虫成虫、细粒棘球绦虫、旋毛虫等交叉反应

重复性：批内/批间变异系数（CV）< 5%

注意事项

实验分区操作（样本处理区、PCR配制区、扩增区），避免气溶胶污染。

熔解曲线出现多峰提示引物二聚体或非特异扩增，需优化条件。

若样本为组织，需充分匀浆确保DNA释放。

本试剂盒仅限科研使用，临床诊断需经当地法规批准。

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