小反刍兽疫病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光RT-PCR技术，针对小反刍兽疫病毒野毒株（PPRV-W）基因组高度保守区域设计特异性引物和荧光探针。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现对PPRV-W的定性检测，适用于临床可疑感染样本的病原学诊断。

试剂组成

25T/盒：

PPRV RT-PCR反应液：437.5 μL ×1管

PPRV混合酶液：62.5 μL ×1管

阳性对照（灭活PPRV cDNA）：40 μL ×1管

阴性对照（偶蹄兽类基因组DNA）：40 μL ×1管

说明书：1份

50T/盒：

PPRV RT-PCR反应液：875 μL ×1管

PPRV混合酶液：125 μL ×1管

阳性对照：40 μL ×1管

阴性对照：40 μL ×1管

说明书：1份

注意：不同批号试剂组分不可混用。

储存条件及有效期

避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器

支持多通道实时荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI系列（如7500、QuantStudio）

Bio-Rad系列（如CFX96）

Roche LightCycler 480

杭州博日系列等

操作流程

样本处理：提取待检样本RNA。

反应体系配制：按比例混合反应液、酶液及模板RNA。

PCR扩增：

逆转录：50℃ 15-30分钟（若需）。

预变性：95℃ 2-5分钟。

循环扩增：95℃ 10-15秒 → 60℃ 30-60秒（40-45循环）。

结果判读：

阳性：Ct值≤设定阈值，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：无Ct值或Ct值＞阈值。

注意事项

实验需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。

试剂开封后避免污染，建议分装使用。

阴阳性对照需与样本同步检测。

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