多里病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I荧光染料法，专为多里病毒RNA的高灵敏度检测设计。通过一步法实现反转录（RT）与实时荧光定量PCR（qPCR）的整合，无需开盖转移，减少污染风险。核心酶系统包含耐热反转录酶和热启动Taq DNA聚合酶，适用于病毒RNA的快速、精准定量分析，检测限可达0.1 pg（高表达靶标）或单拷贝级别（DNA模板）。

产品组分

| 组分编号 | 组分名称 | 20 T规格 | 200 T规格 |

| A | 2×荧光定量预混缓冲液 | 250 μL | 2×1.25 mL |

| B | 反转录-qPCR复合酶混合液 | 20 μL | 200 μL |

| C | RNase-free水 | 250 μL | 2×1.25 mL |

技术参数

灵敏度：

RNA模板：0.1 pg（高表达靶标），1 pg（中等表达靶标）。

DNA模板：单拷贝检测。

重复性：90复孔间Ct值差异≤0.5。

特异性：熔解曲线单峰，无非特异性扩增。

仪器兼容性：支持No Rox/Low Rox/High Rox平台（如ABI、Bio-Rad、Roche等主流机型）。

稳定性：预混液4℃放置24小时性能无显著变化。

实验流程

反应体系配制（20 μL/反应）：

2×预混缓冲液 10 μL

复合酶混合液 1 μL

引物（10 μM）各0.4 μL

RNA模板 ≤2 μL

RNase-free水补至20 μL

反应程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 反转录 | 42℃ | 5 min |

| 预变性 | 95℃ | 30 sec |

| PCR扩增 | 95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec | 40循环 |

| 熔解曲线 | 60℃→95℃ | 连续采集 |

数据采集：

激发波长：471 nm（游离染料），500 nm（结合DNA）。

发射波长：530 nm，建议在延伸步骤采集信号。

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35；

35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

本产品仅限研究使用，不适用于临床诊断。

避免反复冻融，建议分装保存。

操作需在无RNase环境下进行，防止RNA降解。

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