小双节RNA病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

小双节RNA病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green I染料法，专为小双节RNA病毒的高灵敏度荧光定量RT-PCR检测设计。采用一步法技术，将反转录与定量PCR整合于单管反应，减少操作步骤并降低污染风险。适用于临床样本、环境监测及科研领域中的病毒RNA定量分析。

产品组分

| 组分编号 | 组分名称 | 规格（20 T） | 规格（200 T） |

| A | 2×荧光定量RT-PCR预混液 | 250 μL | 2×1.25 mL |

| B | 耐热反转录酶混合液 | 20 μL | 200 μL |

| C | RNase-free H₂O | 250 μL | 2×1.25 mL |

| D | 阳性对照（无传染性DNA） | 50 μL | 50 μL |

技术参数

灵敏度：可检测低至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或1 pg（中等表达靶标）。

特异性：引物针对小双节RNA病毒保守区设计，无交叉反应。

线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

稳定性：预混液在4℃下可稳定保存24小时，-20℃长期保存。

适用仪器：兼容主流荧光定量PCR仪（含No Rox/Low Rox/High Rox平台）。

操作流程

1. 标准曲线制备

标记6管，依次稀释阳性对照（10⁸拷贝/μL）至10²~10⁷拷贝/μL梯度。

每管加入45 μL稀释液与5 μL阳性对照，涡旋混匀。

2. 反应体系（20 μL）

2×预混液 10 μL

引物混合物 0.8 μL

模板RNA 2 μL

RNase-free H₂O补至20 μL。

3. 程序设置

反转录：50℃ 15分钟 → 95℃ 5分钟。

PCR扩增：95℃ 10秒，60℃ 30秒（40循环），熔解曲线分析。

注意事项

操作需在独立洁净区进行，避免气溶胶污染。

阳性对照为无传染性DNA片段，不可用于活病毒培养。

熔解曲线需呈现单一峰，确保扩增特异性。

应用案例

临床检测：对患者咽拭子样本中病毒载量定量，灵敏度达E2级别。

环境监测：水体或物体表面病毒RNA的快速筛查。

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