戈尔迪勒病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

戈尔迪勒病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒用于定性检测人血清、咽拭子或组织样本中的戈尔迪勒病毒（Gordillevirus）RNA，适用于：

临床病原体筛查

流行病学研究

实验室病毒监测

注意：

本产品不可用于治疗决策，阳性结果需结合临床表现及其他诊断方法综合判断。

检测原理

RNA提取：待测样本中病毒RNA的分离纯化（需配合RNA提取试剂盒使用）。

反转录 (RT)：将RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR (qPCR)：

采用 SYBR Green I 染料法，特异性引物靶向扩增戈尔迪勒病毒保守基因区域（如RdRp基因）。

实时监测荧光信号，通过 Ct值 判定病毒载量。

试剂盒组成

| 组分名称 | 规格（96测试） | 保存条件 |

| qRT-PCR预混酶 MasterMix | 1.2 mL × 2管 | -20℃避光 |

| 戈尔迪勒病毒引物混合液 | 150 μL × 1管 | -20℃避光 |

| 阳性对照 (PC) | 1.0 mL × 1管 (10^4 copies/μL) | -70℃ |

| 阴性对照 (NC) | 1.0 mL × 1管 (RNase-free H₂O) | -20℃ |

| RNase-Free ddH₂O | 1.5 mL × 1管 | 室温 |

需自备材料

RNA提取试剂盒

实时荧光定量PCR仪（支持SYBR Green通道）

无核酸酶PCR管/板

微量移液器及灭菌吸头

冰盒、离心机、生物安全柜

操作步骤

1. RNA提取

按RNA提取试剂盒说明书操作，最终用30-50 μL RNase-Free H₂O洗脱RNA。

2. qRT-PCR反应体系配制

| 组分 | 单反应体积 |

| qRT-PCR MasterMix | 10 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| 模板RNA | 5 μL |

| RNase-Free ddH₂O | 补足至20 μL|

每批次需设 阳性对照（PC）、阴性对照（NC） 及 无模板对照（NTC）。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 反转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 关闭 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 关闭 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | | |

| 退火/延伸 | 60℃ | 45 sec | 40 | 开启 |

结果判读

阴性对照（NC/NTC）：Ct值 ≥ 40 或无扩增曲线。

阳性对照（PC）：Ct值 ≤ 32（验证试剂有效性）。

样本判定：

阳性：Ct值 ≤ 38，且扩增曲线呈典型S型；

可疑：38 < Ct值 < 40，建议复测；

阴性：Ct值 ≥ 40 或无扩增曲线。

性能参数

| 指标 | 性能 |

| 检测限 (LoD) | 200 copies/mL |

| 特异性 | 不与常见呼吸道病毒交叉反应 |

| 重复性 | CV ≤ 5% (Ct值) |

储存与运输

储存：-20℃ 避光保存（避免反复冻融 ≥3次），有效期12个月。

运输：干冰或-20℃冰袋保温运输。

局限性

检测结果受样本质量、采集时间及保存条件影响。

病毒基因变异可能导致假阴性。

操作须在符合生物安全等级要求的实验室进行（建议BSL-2+）。

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