小鼠血管生长素(ANG)ELISA试剂盒 新品

小鼠血管生长素(ANG)ELISA试剂盒

产品简介:

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法。预先包被的抗小鼠ANG抗体与样本中的ANG结合，随后加入HRP标记的检测抗体，形成固相抗体-ANG-HRP标记抗体复合物。加入显色底物（如TMB）后，HRP催化底物显色，颜色深浅与ANG浓度正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），结合标准曲线计算样本中ANG的浓度。

产品特点

高灵敏度：最低检测限通常小于10 pg/mL。

高特异性：仅识别小鼠ANG，与其他结构类似物无交叉反应。

宽检测范围：一般为62.5 pg/mL～2000 pg/mL。

重复性好：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。

操作简便：预包被微孔板，无需抗体包被过夜。

试剂盒组成

预包被抗体的酶标板：96孔或48孔微孔板。

标准品：不同浓度的小鼠ANG标准品。

HRP标记检测抗体：用于形成免疫复合物。

洗涤液：用于洗涤反应孔。

底物液：如TMB显色液。

终止液：如硫酸，用于终止显色反应。

其他：封板膜、说明书等。

适用样本

血清、血浆：需避免溶血，按规范处理。

细胞培养上清液：离心去除细胞碎片。

组织匀浆液：按重量体积比匀浆，离心取上清。

其他生物液体：如腹水、脑脊液等。

操作步骤

样本处理：按说明书要求处理样本，避免反复冻融。

标准品稀释：按比例稀释标准品，制备不同浓度梯度。

加样：设置空白孔、标准品孔和样本孔，加入相应试剂。

温育：封板后37℃温育一定时间。

洗涤：彻底洗涤反应孔，去除未结合的物质。

显色：加入底物液，避光显色。

终止：加入终止液，终止显色反应。

测定：用酶标仪在450nm波长下测定OD值，计算样本中ANG的浓度。

注意事项

试剂保存：未开封试剂盒于2-8℃保存，有效期6个月。

避免污染：更换枪头，避免重复使用吸头和试管。

洗涤充分：确保洗涤彻底，避免背景干扰。

显色液保存：TMB溶液避免接触氧化剂和金属。

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

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注意事项

科研用途：仅供科研实验使用，不可用于临床诊断。

操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染，确保实验结果准确。