小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)ELISA试剂盒

小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)ELISA试剂盒

产品简介:

检测原理

采用双抗体夹心法。将抗小鼠VEGF-A的捕获抗体预包被在微孔板上，加入标准品或待测样本后，样本中的VEGF-A与固相抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素结合。最后加入显色底物TMB，颜色深浅与VEGF-A浓度正相关，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样本中的VEGF-A浓度。

产品组成

预包被抗体的96孔板

标准品（含已知浓度的VEGF-A）

生物素标记的检测抗体

HRP标记的链霉亲和素

洗涤液

底物液（TMB）

终止液

样本稀释液

检测范围与灵敏度

检测范围：通常为15.625-1000pg/mL或31.25-2000pg/mL。

灵敏度：可检测低至9.375pg/mL或18.75pg/mL的VEGF-A。

适用样本

血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。

操作步骤

准备试剂和样本：平衡试剂盒至室温，制备标准品和样本。

加样：在酶标板孔中加入标准品、样本和相关试剂。

温育：37℃温育一定时间，使抗原抗体充分反应。

洗涤：洗去未结合的物质，避免干扰。

加酶标抗体：加入HRP标记的链霉亲和素，再次温育。

再次洗涤：洗去多余的酶标抗体。

显色：加入底物液，避光显色一定时间。

终止反应：加入终止液终止显色反应。

读数：使用酶标仪测定各孔吸光度，根据标准曲线计算样本中的VEGF-A含量。

注意事项

样本处理：避免溶血、污染和反复冻融。

试剂使用：严格按照说明书操作，避免使用其他厂家的试剂替换。

洗涤步骤：充分洗涤，避免假阳性结果。

结果解读：每次实验需做标准曲线，确保结果准确。

储存条件

未开封试剂盒：按各组分标签所示保存，通常标准品和酶标记抗体需-20℃保存，其他试剂4℃保存。

开封后试剂盒：剩余试剂按标签保存，酶标板需干燥密封于-20℃。

如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

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注意事项

科研用途：仅供科研实验使用，不可用于临床诊断。

操作规范：严格按照说明书操作，避免交叉污染，确保实验结果准确。